بكمل في الـ procedure Handling of Sample Unit زي
ما قلنا في كل مرة الأساس العين بدها تكون على الـ
room temperature إلا إذا كانت العينة ام تلجة، بدي
أحافظ عليها ام تلجة، إذا كانت ام جمدة، بدي أحافظ
عليها ام جمدة طيب، لو بدي أشتغل على عينة مجمدة،
المفترض إنه أستناهلة عند مدسيها، بدي أعملها
thawing الـ thawing بيكون أول أشي بقى نزلها على
الـ refrigerator، على التلاجةطيب لو مستعجلة عليها
و بدي أشتغل عليها بسرعة بدي أسرع عملية ال
«thawing» أنه بحطها في ال «water bath» تحت «time
and temperature conditions which prevent microbial
growth or death»درجة حرارة والـ Time ما بيسمحوا
أنه يزود أو يقلل معدد الـ microorganism اللي
بالعينة فبحطها في الـ water bath درجة ما تزيد عن
45 و الـ Time ما يزيد عن ربع ساعة Analyse sample
unit as soon as possible مفترض إنه مجرد ما تصل
العينة بدي أشتغل عليها مباشرة preparation for
analysis إيش هي التحضيرات اللي بعملها من ناحية أو
إيش بدي أجهز ال media تعتيفي الحاجات اللي بدنا
نشتغل علي ميديا إبراط موديوفايد اتريبتك سويبروت ود
نوفو بيوسين أو ممكن أستخدم الـ AEP كمان بدي أعقم
المكان اللي بدي أشتغل عليه باستخدام الـ suitable
disinfectantبالنسبة للـ preparation للـ sample
العينة لو كانت liquid ما عليّ لغير أعملها
agitation لأن هيك بتصير homogeneous طيب لو كانت
solid معناته بدي أخد من أكتر من مكان، من فوق أو من
تحت، من الجانب، من الوسط، و بعدين بحط عليها محلول
معقّمة و بعملها باستخدام الـ stomacher أو الـ
blender و هيك و اتحولها من solid إلى liquid و
بيصير homogeneousIt's recommended that a composite
contain not more than five analytical units أحنا
قلنا إنه ال lot العينة الكلية بدي أحطها في
containers ومنها بدي أاخد ال sample unit فال
containers هاي مش لازم منها تزيد عن خمسةبعد هيك
بالنسبة للسامر بدي أعمل تخفيف واحد لعشرة كيف بعمل
تخفيف واحد لعشرة باخد خمسة وعشرين جرام أو مل من
العينة بتاعتى و بحطها في ميتار وخمسة وعشرين مل من
ال enrichment ال broth والتي تكون مثلا ال modified
tryptic soy broth أو ال EEP بعد هيك باستخدام ال
stomacher أو ال blenderمتابلجة لـ Secondary
Enrichment بروث بدأت مباشرة في الـ EEB يجب أن يكون
فعله عندما يكون هناك عدد كبير من البكتيريا التي
تقاتل العميل في المجموعة
بنجألها لما يكون فيه high microbial load في العينة
عدد كبير من الـ microorganism ممكن هي تيجي و تنافس
الإشارة شكولاي O15707 على الـ nutrient فتيجي هي و
تستولي على الـ nutrient وبالتالي الإشارة شكولاي
بتسيق عندها الظروف وبالتالي مش هتنموSome spices
such as onion and garlic powder are antimicrobial
in nature معروف أنه التوابل البصل التوم عندها
antimicrobial effect يعني زي تأثير ال antibiotic
على البكتيريا ممكن أنها تقلل من عدد ال micro
organism when analyzing spices or a product
containing large amount of spices لما بدي أتعامل
مع عينة التوابل أو عينة فيها كميات كبيرة من
التوابل اللي بدي أعملهبدي أضيف نصف المية بوتاسيوم
صلفات، شو بتعمل هاي؟ بتقلل من الـ Antimicrobial
effect لـ spices، فبروح أضيف النصف المية على ال
media اللي عندى، Modified, triptoxoic broth قبل
اللي أحطهم بال Autoclap، يعني بجهز ال media lip
brothبعدين بحط فيها نصف المية بوتاسيوم صلفات
بداخلهم على الـ autoclave بتعقّمه بعد ما يتعقّم
بروح أخد 25 جرام أو من العينة و بحطها في ال media
اللي فيها نصف المية بوتاسيوم صلفات Garlic
especially effects Escherichia coli O157therefore
garlic or garlic containing product need to be
diluted واحد لمية معناته لما بتكون عندي العينات هي
garlic بدي أعمل secondary enrichment فبصير التخفيف
واحد لمية كمان ممكن يعني لو لو لاحظت أنه مافي نمو
و روحت اعملت من واحد لمية و بعدين روحت زرعتوكملت
بالـ procedure عادي لقيت مافي نمو معناته فيه تأثير
للـ garlic على البكتيريا بروح أخفف من تأثير الـ
garlic الـ antimicrobial effect للـ garlic بروح
أعمل تخفيفات أكتر، واحد لألف، واحد لعشر ألف other
spices also may need to be analyzed using larger
dilution ممكن كمان أنه بحتاج أعمل تخفيفات أكتر
after the addition of Samuel to the broth بحاجة
إنه أضبط الـ pH ليش؟ لأنه قلت بدي يكون ال food
متعادل لإنه أي تغيير سواء أسدك أو basic بدي فقط
يكون ناتج من البكتيريا أو يأثر على ال pH indicator
اللي عندى في ال media فكيف بدي أضبط ال pH باستخدام
ال NaOH والHCl أسد أو basic؟كمان و أثناء شغلي على
العينة بدي أمشي معايا controlات positive and
negative control should be set up at the same time
في نفس الوقت اللي أنا بشتغل فيه عينتي، بدي أعمل ال
controlات بعمل incubation لعينة وال controlات لمدة
24 ساعة على درجة حر 42 Celsiuseither screen the
enrichment growth for E.coli O157 by using rapid
test فى بيكون فحصات زى فحص الحمل أنه بس بدي أحط
العينة فى مكان للـ sample و بعدين بقى ألاحظ هل
موجود E.coli أو لا النتيجة طبعا هي بتكون سريعة
فبظهر أنه يعني فى خط معناته فى موجود E.coli متى
بيستدعي الأمر أنه أعمل secondary enrichment بس فى
ميديا الـ EEPThis step must be used when a rabbit
cat has identified the presence of Escherichia
coli O157 يعني أنا لما حطيت عينتي في ال media
لبروث اللي عندى وروحت حطيت جزء من هاي ال media مع
البروث حطيتها في ال rabbit test في الكاسيت اللي هو
اللي مش بهتبع الحمل اللي ال pregnancy testلحظة إنه
في وجود الإشريشة KOLI 015787 روحت بعد هيك فكملت
الـ procedure وعملتها فعملت بعد هيك الـ selective
culture agar وعملت الـ biochemical أبدًا ما كان في
عندي نمو مافي نمو للإشريشة KOLI مع إنه كان موجود
في الـ rapid test معناته بأفهم تلقائيًا إنه
العيناتفيها تأثير Anti-microbial effect راح أثر
على الـ Escherichia coli أو ممكن يكون فيه عدد كبير
من البكتيريا other than Escherichia coli O157 عنده
في العينة راحت هي أخدت الـ nutrient وبالتالي الـ
O157 أشتفت ما نمت يعني طلع معي positive في ال
rapid test but it was not isolated from the
primary enrichment broth اللي هي لمالما أعمل أخد
من ال primary و أزرع على ال selective agar على
مثلا الأسماك بلاحظ ما فيه نمو فالاشياريش IO157 may
be difficult to isolate from samples with high ACC
levels ACC اللي هي aerobic calorie count أو
بنسميها total viable countيعني لما يكون فيه عدد
كبير من microorganism other than الشيريشاكولاي
O157007 After agitation of the enrichment brought،
شو بعمل؟ هي عندي ال primary، بروح بعمل agitation،
باخد 1 مل من ال primary، بروح أزرعه في تسعة مل من
ال EEP طبعاً هاي بتكون selectiveفقط بتنمي لإشريشك
و IO157H7 وبتعمل inhibition لباقي الأنواع بعد هيك
بروح أعملها incubation ع درجة حرارة 35 أو 37 لمدة
24 ساعة وبعدين follow confirmation steps for
typical kidneys أنه بدي أعمل ال biochemical و ال
confirmatory testالـ Selective Isolation المقصود
فيها اللي هي خطوة الـ Selective Culture Agar يعني
بدي أخد و أزرع على أجار بلاي ال dilution of each
enrichment broth يعني لو أنا كنت عاملة ال primary
enrichment ماكان في داعي أنه أعمل ال secondary
فبروح بعمل تخفيفات هي قلنا ال primary تخفيف واحد
لعشرة بروح أعمل إيتيوباتبعمل تخفيف واحد ل 100 و
واحد ل 1000 و واحد ل 10 ألف و واحد ل 100 ألف كيف؟
بروح أخد من عندى اللى بالفلوسك واحد مل بحطه على
تسعة مل فى التيوب بعدين صار تخفيفه هيك عشر قصارى
باتنين بروح أخد واحد مل منه على التيوب اللى بعده و
هكذا هيك صار عندى serial dilution من كل التيوب
بروح أخد 100 مايكرون و بزرع على البلات طيببلاي دي
ليوشنز of each enrichment broth ontomodified
hemorrhagic coli and sorbitol مكونكي أجاري بلاد
بأزرع في ال media high أو في ال media التانية
بعملهم incubation على درجة حرارة 42 لمدة 24 ساعة
due to the increased selectivity of sorbitol
مكونكي اللاحظوا أن ال media sorbitol مكونكي فيها
selectivity أعلى من ال hemorrhagic coliSelectivity
أعلى يعني فقط بتنمي الإشريش الكولاي O157L7 وبتعمل
inhibition لباقي الأنواع فرصة إنه ينمو شغلات تانية
و تعطي لهم colorless هاي بتكون قليلة جدا لما
أستحضر ال media تحت الأسمك لهيك ال count may be
one log less than onmodified hemorrhagic coli
هلاحظ العدد اللي راح يطلع معي colorless هيكون قليل
لما أستخدم ميدة الأسماك لكن هيكون أكتر في ال
hemorrhagic coli ليش أكتر في ال hemorrhagic coli
لأن ال selectivity فيها أقل on the modified
hemorrhagic coli typical الشريشة coli O157H7 كونه
نزق كبيرcolorless بدي تكتبوا كلمة blue تكتب بدلها
colorless لاحظوا ان الشريشة كولاي O177 مابتعمل
fermentation لسكر السوربيتول الموجود في ال
hemorrhagic كولاي فلون الكوليس بدي يكون colorless
نفس الأشياء على الصوربيتول ميكونكي لاحظوا أن
الإشاريش اكولاي O157H7-colon is a beer colorless
أو ممكن تاخد بير دا tint of the media ممكن تاخد
لون ال media نفسه or a gray to pink with smoky
centersOther Serovars of Escherichia coli
including O157 not H7 Serovar يعني Serotype
Serotypes غير Escherichia coli O157 H7 هتاخد اللون
الأصفر على الـ Modified Hemorrhagic coli ليش أخدت
اللون الأصفر؟ حسب الـ pH Indicator اللي فيها
فلأنها بتعملfermentation لسكر السوربيتول فبتغير
لون الكلونيز إلى لون أصفر أما الشريشة كولاي لما
تعمل fermentation لسكر السوربيتول في ال media
سوربيتول ماكنكي بتعطي لون أحمر some of these
sorbitol positive colonists may be pathogenic also
مش فقط الاشريشة Coli O157H7 هي اللي بتكون
pathogenic ممكن كمان أنواع تانية sorbitol positive
وبرضه بتكون pathogenic
Use the purified colonies and continue
confirmation steps نفس الأشي بدي أكمل ال
biochemical و بدي أكمل ال confirmatory بأكملهم على
مين بالظبط؟ على ال colonies اللي بتطلع لونها
colorless في حالة الأسمك أو في حالة ال modified
hemorrhagic coli Do a gram stain طيب الشريشة coli
O157H7 هتكون بالجرام stain red لإنها جرام negative
بستخدم Rapid Identification Kitsconfirm isolate as
an O157 باستخدام ال latex agglutination kits برضه
راح أعمل ال invic و باستخدم اليوريا slant اليوريا
slant هدا فحص أنه بيدور على ال .. بيدور هل ال
organism عنده يورياز أو لأ لو فيه يورياز معناته
هتكسر اليوريا هتطلع أمونيا الأمونيا بترفع ال pH
معناته بيغير لون ال media من لون أصفر إلى لون pink
Complete Serological Testing باستخدام O157
Antisera و O87 Antisera بعد هيك لما أعزلها بدي
أعملها Resuscitation بدي أعملها NH بروح أحطها في
Media Growth من نازي Growth أو ممكن أحطها في
Motility Agar أكتر من مرة على الأقل إنها تكون تلات
مرات الهدف إنها بتعمل ال Resuscitation بتعمل NH
لإلها نيجي على المخطط HADلو بأدور على أشريشة Koli
O157H7 فالتسلسل بدي يكون أول إشي بدي أزرع على
الأسماك الـCT هدول اللي بالأول الـC هي اختصار
لـCefexime هي antibiotic والـT لـTeluride كـ
selective agent زرعت عليهالو كانت Sorbitol فيرمنتر
معناته خلاص بدي أكس عليها أنا high ما بتعني ليه
لأنه أنا عارف الإشريشة كلها O157A7 ما بتعمل
fermentation فلو كان لون الكونز pink أو red معناته
مش high طلبي طيب لو كانت non-sorbitol fermenter
يعني لون الكونز بيكون colorless لسه أنا هيك مش
متأكدة بحاجة إنه أعمل فحوصات تأكدية أكترزي مثلا ال
agglutination test أنه بيكون في عندي Anti O157 و
Anti H7
لو طلع negative ما عندها O157 ولي عندها H7 معناته
هذه مش هي الشريشة كلها O157 وH7 فبتخلص منها خلاص
discard لو طلع positive طلع عندها O157 وH7 برضه
بحاجة أتأكد في حصات تأكيدية أكتر زي ال biochemical
test كمان بقدر أنه أرسلها ل ال reference
laboratory to confirm ال ID لإلها مثلا أنه ال gene
typing و ال phage typing