بالنسبة للـ disinfectant choice, preparation and
use of disinfectant كيف راح أختار الـ disinfectant
المناسب أو كيف راح أحضره و لشو راح أستخدمه
specific disinfectant يعني specific working
strength are used for specific purpose لكل
disinfectant بيكون له قوة معينة بيشتغل عليها
working strengthو هاد راح يستخدم لغرض معين، ع سبيل
المثال الـ Hypochlorite، هاد الـ Hypochlorite الهدف
منه نستخدمه عشان نتخلص من الـ discard pots for
pipe and slide نتخلص من البقع الموجودة على الـ
pipe و على الـ slide، وكيف الـ working strength
له؟ يعني التركيز يكون فعال عنده 25% من 100% V
slash V معناه أنه الهيبو كلورايت رح يكون liquid و
الـ diluent liquid كيف بدي احضر 25% من 100% من
الهيبو كلورايت؟ بقولي خد 25 من 100 مل هيبو كلورايت
المركز، باخد منه 25 من 100 مل، بحط عليه 75 مل ديستيل ووتر كمان من ضمن الـ disinfectant، الاثانول
70% كيف بدي احضر الاثانول 70% من الـ Absolute
Ethanol؟ من الـ 100% Ethanol راح أخد 70ML، راح أحط
على الـ 70، 30 ML ديستل ووتر راح أعملهم mix وهيك
راح أحصل على 70% Ethanol، طيب لو سألت سؤال، مين
الـeffective، more effective؟ الـEthanol 70% ولا
الـpure أو الـabsolute Ethanol؟ طبعاً الـEthanol
70% هذا هو فعال أكثر وعنده القدرة أنه يقضي على
الـmicro organism أفضل من الـ100% absolute، معكم
واجب، ليش الـEthanol 70% more effective than
absolute Ethanol؟
Note, when preparing or working with a strength
solution from a stock and dealing with powder
form، بقول إن بدك تتعامل مع أي مادة من الشكل
الأساسي اللي لها، الشكل الأولي، يعني مثلاً بدي
أتعامل مع الـhypochlorite اللي هي 100% أو مثلاً بدي
أتعامل مع الـ media اللي بتكون powder، لازم أنه أرتدي
اللي هي الـEye Protection أو الـGoggles،
الـGloves، الماسك، ليش؟ To avoid irritant or
harmful effects.This disinfectant for use at working
strength should be freshly prepared from full
strength stock or powder form يعني لو بدي أحضر
إيثانول 70% بقولي خديها من الـ full strength stock
من المصدر الأساسي اللي هو يكون الـ absolute، إذا
حضرت 70% بدي أخد الـ 70%، الـ 100% إيثانول، بدي أحضر
الـ media بدي أخدها من الـ powder من الشكل الأولي
لها، use working strength hypochlorite on day of
preparation بالنسبة للـ hypochlorite وغيرها كذلك من
الـ disinfectant بقولي الأفضل أنه أحضرها و أستخدمها
في نفس اليوم لأن هيك راح تظلها الـ strength فعالة
working strength راح تظلها فعالة لو استخدمت الـ
disinfectant في نفس اليوم اللي حضرته فيه، لاستركب
لات هي طريقة لزراعة البكتيريا، الطريقة هي باختصار
الهدف منها أنه بحصل على كولوني بتكون من نوع واحد
isolated pure colonies كيف؟ هيكون في عندي طبقين
طبق فيه بكتيريا مختلفة طبعاً أكثر من نوع من
البكتيريا، بتلم على هذه الطبق والطبق الثاني هيكون
فاضي، باستخدام loop راح أخد كولوني واحدة من الطبق و
أزرعه، أوزعه على كل الطبق الفاضي، وهيك رح تتخفف
العينة، صار عندي كولوني واحدة بس وزعتها على كل الطبق
و بالنهاية رح أحصل على كولوني من نوع واحد، فالستريك
بلايات بستخدم فيه الـ loop is used for preparing a
strict plate، قولنا الـ loop بيكون سلك اللي بالنهاية
دائرة أو بيكون اللي بالنهاية زي شكل الإبرة، this
involves the progressive dilution of an inoculum
of bacteria or yeast، بيكون عندي بالأساس في طبق
بكتيريا أنواع مختلفة أو yeast أنواع مختلفة، ما عليه
غير أخد بسكينة واحدة وأزرعها على طبق فاضي وهيك راح
تتخفف العينة، عندي هيصير dilution، راح أحطها وأزرعها
على الـ surface وهذا الـ surface فيه الأجار بيكون
البلات في ميديا متصلبة و بروح أزرع باستخدام الـ
loop البكتيريا عليها، the aim of the procedure، ايش
الهدف من الـ streak plate أنه بحصل على single isolated
pure كولونيه، pure يعني من نوع واحد من البكتيريا
الخطوات من واحد لعشرين، طبعاً هاي مش راح أطلبكم فيها
إنما هي كشغل عملي فأنا بدي أشرحهم حالياً، ايش اللي
بده يصير بالأساس راح أشتغل اللي هي aseptic
technique هيكون في عندي لهب flame تمام، هيكون فيه
loop و فيه طبقين، طبق فاضي و طبق ثاني فيه بكتيريا
مختلفة، شو بدي أعمل؟ الـ loop بدي أعقمه، كيف بتعقم
الـ loop؟ بحطه على الهيت لعند ما يصير redness لونه
أحمر، طب هل أعضوه بمجرد ما صار أحمر بدي أخد فيه الـ
colonies؟ طبعاً لأ، الحرارة high ممكن تقتل البكتيريا
فباجي أزرعها مش راح يصير عندي نمو، فإيش بدي أعمل؟
بعد ما أعقم بدي أستنى ثواني شوية بس، بعدين بروح أخد
كولوني واحدة، كيف بدي أخد الكولوني؟ بفتح الطبق
زاوية 45، مش لازم أفتحه على الآخر، باستخدام الـ loop بس
بأخد كولوني واحدة، قولنا بسكر الطبق و بروح على الطبق
تبعي، الطبق الفاضي، بدي أتخيل هو عبارة عن أربع أرباع
باجي على أول ربع و بأزرع فيه البكتيريا بشكل
continuous يعني مش راح أرفع الـ loop خالص، رايح جاي
بضني أزرع أزرع لعين ما يخلص أول ربع، بغطي، بالنسبة
للـ loop بروح عقمه ثاني، يعني بيصير لونه أحمر بقصف عليه
شوية، هل أروح أخد كمان كولوني من الطبق اللي فيه
كولونيز؟ لأ، أنا قلت كولوني واحدة بتكفيني، بدي أخففها
الهدف، بدي أخففها عشان أحصل على pure كولوني، بروح
أدير الطبق الفاضي بزاوية 90 درجة وهيك راح أصل
للربع الثاني، درته وباجي باستخدام الـ loop وبروح على
آخر الطبق الأول، على آخر الربع الأول، بعمل ثلاث
خطوط منفصلة، بأخد بكتيريا من الربع الأول آخره و
بعمل خط، بروح على مكان ثاني و بعمل خط، برفع الـ loop و
بعمل كمان خط ثالث، بسكر، بعقم الـ loop لعند ما يصير لونه
أحمر، بستنى لعند ما يبرد شوية وبعدين بلف الطبق
بزاوية 90 درجة وهيك راح أحصل على الربع الثالث
الربع الثالث من وين ببدأ فيه؟ من نهاية الربع
الثاني بأخد بكتيريا و بوزعها كمان، بعمل ثلاث خطوط
أو خطين منفصلين، يعني بعمل خط و برفع الـ loop بعمل خط
ثاني و برفع الـ loop، هيك عامة العينة بتتوزع، كان عندي
أكثر concentration كان للبكتيريا في الربع الأول
الربع الثاني خففناها، الثالث خففناها أكثر، بسكر
بعقم و بروح من الربع .. بدير 90 درجة و من
الربع الثالث بعمل زي زاج و بعمل ثلاث نقاط بعيدة
عن بعض من نهاية الربع الثالث، بعمل زي زاج و ثلاث
نقاط بعيدة، هو بالتالي بيقول راح تطلع عندك الكولوني من
نوع واحد في الربع الرابع، هتكون colonies بيور هذه
هي اللي راح أخد منها و راح أشتغل عليها، الـ
biochemical test، لو أخدت من الربع الأول ممكن يكون
عندي أكثر من نوع من البكتيريا لكن الربع الرابع على
الأكيد هيكون نوع واحد، و التالي بأشتغل عليها الـ
biochemical test
هيك خلصنا الـ spread plate، ركزوا معايا، قلت الـ
spread plate بأخد الـ colonies وبعملها تخفيف، أما الـ
bore plate و الـ spread plate الاثنان بأخد فيها
broth، ما تنسوا هالشعلة، الـ streak plate قلنا بنستخدم
فيها loop مع colonies، نيجي على الـ pour plate، الـ pour فاكرين
زي ما أنا قلت بأول معمل أنه هيكون في عندي عينة
broth سائلة بروح أخدها و بقصب مقدار بسيط منها في
قاع الطبق الفاضي، فوق العين أنا بروح أصب الميديا
اللي بتكون liquid، بستنى عليها لعند ما تتصلب،
هلاحظ أن البكتيريا راح تنمو عندي فوق وفي الميديا
وتحت، لكن أكثر شيء هتكون نامية جوا الميديا، وعدد
قليل هيكون نامي فوق، لكن الاختلاف بين البكتيريا أو
الـ colonies اللي نمت فوق ونمت في الميديا واللي تحت هو
الـ size فالأكبر size هيكون اللي نمت على سطح، ليش؟
صار في عندها مجال أكبر إنها تكبر في الـ size تمام،
a pour plate is one in which a small amount of
inoculum مفروم الـ broth culture، الـ broth culture
يعني، على سبيل المثال، أخدت عينة اللبن، بدي أشوف
قداش فيها البكتيريا، فأخدت 25 جرام من الـ yogurt، خففته
باستخدام 225 مل ديستيل ووتر أو normal saline، صار
عندي التخفيف 1 لـ 10 اللي هي 25 على 25 زائد 225 أو
20 تمام، بروح أخد مقدار من هذه البروت وليكن مثلاً
100 مايكرو لتر من عينة البروت وبحطها داخل تيوب
وهذا التيوب بقصب عليه أجار هيكون molten بالأول
وبعدين هيتجمد هلاحظ أن ال colonies بتلموا في اليوغرت
تحت وفي النص وفوق لكن أكثر إشي هتلموا على سطح نفس
الإشي بقولي ممكن أاخد من ال birth culture أخد 100
microliter من العينة أحطها في طبق فاضي وأصوب
عليها ال media وأستنى لعند ما تتجمد هلاحظ نمو ال
colonies فوق وتحت وبالوسط
Poor plates allow microorganisms to grow both on
the surface، هتنمو على السطح، and within the
bottom، within the medium، and in the bottom كمان
برضه، جوا ال medium، وتحت كمان، في السطح، وجوا،
وتحت most of the colonies grow within the medium
أكثر إشي هلاقيها تلمو داخل ال media and are small
in size هتكون ال size لإلها صغيرة ليش ما إلها
مساحة مافي مجال إنها تلمو،الجميع اللي بينمو على
السطح هيكون عدد قليل هو اللي بينمو على السطح هتكون
نفس الـ size ونفس المظهر فيما لو أعملناها بطريقة
الـstrike plate لو زرعناها على السطحية بطريقة
البكتيريا الهوائية ليش إنه هيصار إلها كده في مجال
إنها تلمُّ ويزداد الـsize ده إلها، بقول إذا كانت
dilution معروف وليكن مثلا 1 من 10 حضرناها كفي
العينة الأصلية 1 من 10 عن طريق 25 جرام من اليوغرت
على 25 زائد 225 من الـdiluent
and the volume of inoculum usually واحد من عشرة
centimeter مكعب أو ملّي أو ملي لتر لو
كان ال dilution واحد من عشرة وكان ال volume اللي
أخدته من ال broth وزرعته على الطبق كان واحد ملّي، وانا
عديت الـ colonies بتاعون البكتيريا اللي لمّت
فبالتالي بكل سهولة بقدر أعرف الـ concentration
للبكتيريا من خلال القانون التالي الـ concentration
يساوي N على S ضرب D، الـ Concentration هو التركيز
للبكتيريا في العينة بيساوي الـ N هو عدد ال colonies
اللي عديتها مقسوم على S ضرب D، دي هي ال dilution
واحد من عشرة، وال S هي قداش أخدت volume من ال
broth و زراعتها على الطبق اسمها ال volume plated
شرط أساسي ال volume plated يكون بواحد ملّي لو
كانت مثلا meat micro هتكون واحد من عشرة ملّي، فلازم
تتحول، ممنوع تحلوا أي سؤال بوحدة ال micro letter
لازم تكون ال volume plated أو ال اس بال milliliter
بالنسبة لل procedure من واحد لتسعة نفس اللي قولتها
note the base of the plate must be covered لازم
يكون القاع للطبق مغطى بالميديا، ليك بنعمل
agitation ونحط من 15 ل 20 ملّي اجار، مست not touch
the lid، مش لازم انها تكون بتلامس الغطا، ال surface
must be smooth with no bubbles، إنه لو كان فيها
bubbles، بنتخلص منها من خلال ال flames using a
spreader، spreader معناه إشي بيوزع، بيقول لي لو
كان عندي طبقة وهالطبقة في ميديا ومتصلبة، روحت جيبت
ال broth برضه كمان high broth من ال broth culture
حطيت مقدار معين في نص الطبق باستخدام ال by bit
مثلا حطيت meat micro من ال broth حاطيتها في نص
الطبق، بحاجة إنه أوزعها على كل الطبق شو بستخدم؟
بستخدم حاجة اسمها spreader أو اسمها L shape شكلها
عامل زي شكل القلم هي بتكون من الإزازة قبل
لاستخدامها شو بدي أعمل؟ بدي أعقمها، هيكون في cup،
في 70% كحول، بأحط عند القاعدة، بحط .. بحطها في
الكحول وبعدين بمررها على اللهب، باجي على نص الطبق
وبوزع ال broth لاستخدام القلم sterile spreaders
are used to distribute inoculum over the surface
of already prepared agar plate يعني هو هيكون agar
موجود وجاهز متصلبة، راح يكون حاط فيها broth وهدي
هتوزع ال broth على الطبق، wrapped glass spreader may
be sterilized in a hot air oven، ممكن نغّطيها ال
spreader بعدين أحطها في الـ oven وهيك بتتعقّم، ممكن
أعقمها من خلال flaming with alcohol، it's advisable
to use agar plates that have a well-dried surface
so that the inoculum dries quickly، بقولي الأفضل إنه
أستخدم الطبق أن يكون ما صار فيه condensation والمية أو
قطرات الماء ما نزلت على الميديا، فبدي ألاحظ أنها
تكون ناشفة، طيب فيما لو لاحظت إنه صار فيه
condensation والمي كانت نازلة على ال media شو بدي
أعمل؟ بعملها ال drying باستخدام أني أحطها على ال
incubator درجة حارة 37 for several hours، تمام، مثلا
ممكن أحطها وأرجعلها تاني يوم وهيك بلاقيها إن كل
المي اللي فيها نشفت أو ممكن أحطها في ال hot air
oven من درجة حارة 55 ل 65 من نص على ساعة
وهيك راح نتخلص من المي الموجودة على ال media في
حاجة اسمها ال spread plate هي طريقة لها الزراعة
اسمها spread plate أو lawn plate، بيكون أنا
بالأساس زارعة البكتيريا عندي في ال growth culture
بروح بجيب cotton swab إيش عامل زي شكل نكاشات
الأسنان هي طبعا لازم إنه أعقمهم بروح ألفهم بسوا
الفان وبعقمهم، بتعقمهم بأخد واحدة منهم وبحطها في
الـ broth ال media ال broth اللي عندي اللي فيها
العينة بعدين بحطها على الطبق وبصير أدهان وبوزع
كل الطبق continuous هذه الطريقة بستخدمها أو
بلجأ لها في حالة المضادات الحيوية بدي أشوف هذه
البكتيريا مقاومة أو حساسة لل antibiotic head، شو بدي
يصير؟ قولنا الطبق هيكون فيه agar متصلب تمام بروح
بجيب ال cotton swab من ال media إلى ال broth و
بدهن على ال agar عندي بروح أستنى تقريبا نص ساعة
لعند ما تجف، بعد نص ساعة بجيب أقراص ال antibiotic
باستخدام الملقطة بروح أحطهم على ال media، بس قبل
أحطهم على ال media لازم أكون عاملة لهم مكان
فباستخدام التب بجي بأخذق ال media تمام بروح بحطها و
بعد كده بروح أعملها incubation، باجي تاني يوم بشوف
هل البكتيريا حوالين هاد القرص نمت ولا لأ، لو نمت،
بعناتها البكتيريا resistance يعني ما بتتأثر بال
antibiotic head، لو لاحظت تاني يوم إنه صار في zone
of inhibition يعني ما كان في نمو خالص، مع أن الكلام
البكتيريا sensitive يعني حساسة لل antibiotic head
فمن خلال هذه الطريقة الدكاترة بيعرفوا إيش ال
antibiotic إن البكتيريا مقاومة لإله وإيش حساسة
لإله على أساس بيعطي المريض العلاج
الـ Spread plate أو lawn plate should result in a
culture spread evenly over the surface of the
growth medium، راح أوزعها شكل متساوي هتكون
continuous باستخدام ال cotton swab، this means that
they can be used to test إيش الهدف منها؟ الهدف إنه
بدي أختبر ال sensitivity للبكتيريا to many
antimicrobial substances، for example إيش ممكن شغلات
إلها مفعول ضد الميكروبات؟ mouthwash اللي هو غسول
الفم ممكن أستخدم يعني بدل الأقراص ال antibiotic ال
garlic ممكن أستخدم وأستخلص التوم وأحطه في
الفرغات وأشوف تأثيرها على البكتيريا، هل البكتيريا
هي حساسة أو مقاومة لإلهم؟ كمان الـ disinfectant و
ال antibiotic، الـ spread plate can be used for
quantitative work، يعني هاي طريقة من طرق ال
quantitative، ليش؟ بالنهاية راح يطلع بكتيريا وراح
أعدها، if the inoculum is a measured volume usually
measured، النيكلون المقصود فيها اللي هي ال S في
القانون، يعني ال volume plated، لو كانت واحد من عشرة
ملّي، وكان عندي ال dilution معروف، وبروح أعد ال colonies
وبطبق بالقانون وهيك بعرف قداش عندي ال
concentration، ال procedure من 1 ل 16 نفس اللي
قولتها في note this operation must be carried out
quickly to minimize the risk of contamination، لما
بدي اجي أوزع ال broth على ال agar لازم اعملها
بسرعة لحتى امنع ال contamination