بالنسبة للـ disinfectant choice preparation and
use of disinfectant كيف راح أختار ال disinfectant
المناسب أو كيف راح أحضره و لشو راح أستخدمه
specific disinfectant يعني specific working
strength are used for specific purpose لكل
disinfectant بيكون له قوة معينة بيشتغل عليها
working strengthو هاد راح يستخدم لغرض معين ع سبيل
المثال الـ Hypochlorite هاد الـ Hypochlorite الهدف
منه نستخدمه عشان نتخلص من الـ discard pots for
pipe and slide نتخلص من البقع الموجودة على الـ
pipe و على الـ slide وكيف الـ working strength
لإله؟ يعني التركيز يكون فعال عنده 25% من 100%V
slash V معناه انه الهيبو كلورايت رح يكون liquid و
ال doluent liquid كيف بدي احضر 25% من 100% من
الهيبو كلورايت بقولي خد 25 من 100 مل هيبو كلورايت
المركز باخد منه 25 من 100 مل بحط عليه 99.75 مل
ديستيل بوتر كمان من ضمن ال disinfectant الاثانول
70% كيف بدي احضر الاثانول 70%من الـ Absolute
Ethanol من الـ 100% Ethanol راح أخد 70ML راح أحط
على الـ 70 30 ML ديستل واتر راح أعملهم mix و هيك
راح أحصل على 70% Ethanolطيب لو سألت سؤال، مين
الـeffective، more effective؟ الـEthanol 70% ولا
الـpure أو الـabsolute Ethanol؟ طبعاً الـEthanol
70% هذا هو فعال أكتر وعنده القدرة أنه يقضي على
الـmicro organism أفضل من الـ100% absolute معكم
واجب، ليش الـEthanol 70% more effective than
absolute Ethanol؟
Note, when preparing or working with a strength
solution from a stock and dealing with powder
form، بقول إن بديك تتعامل مع أي مادة من الشكل
الأساسي اللي لها، الشكل الأولي، يعني مثلا بدي
أتعامل مع الـhypochlorite اللي هي 100% أو مثلا بدي
أتعامل مع الميدا اللي بتكون powder، لازم أنه أرتدي
اللي هي الـEye Protection أو الـGoggles،
الـGloves، الماسك، ليش؟ To avoid irritant or
harmful effects.this infectant for use at working
strength should be freshly prepared from full
strength stock or powder form يعني لو بدي أحضر
إيثانول 70% بقولي خديها من الـ full strength stock
من المصدر الأساسي اللي هو يكون الـ absolute إذا
حضرت 70% بدي أخد الـ 70% الـ 100% إيثانولبدي أحضر
ال media بدي أخدها من ال powder من الشكل الأولي
لإلها use working strength hypochlorite on day of
preparation بالنسبة للhypochlorite وغيرها كذلك من
ال disinfectant بقولي الأفضل أنه أحضرها و أستخدمها
في نفس اليوم لأن هيك راح تظلها ال strength فعالة
working strength راح تظلها فعالة لو استخدمت ال
disinfectant في نفس اليوم اللي حضرته فيهلاستركب
لات هي طريقة لزراعة البكتيريا الطريقة هي باختصار
الهدف منها انهبحصل على كولوني بتكون من نوع واحد
isolated pure colonies كيف؟ هيكون في عندي طبقين
طبق فيه بكتيريا مختلفة طبعا اكتر من نوع من
البكتيريا بتلم على هذه الطبق والطبق التاني هيكون
فاضي باستخدام loop راح اخد كولوني واحدة من الطبق و
ازرعه اوزعه على كل الطبق الفاضيو هيك رح تتخفف
العينة صار عندى كلني واحدة بس وزعتها على كل الطبق
و بالنهاية رح أحصل على كلني من نوع واحد فالستريك
بلايات بستخدم فيه ال loop is used for repairing a
strict plate قولنا ال loop بيكون سلك اللي بالنهاية
دائرة أو بيكون اللي بالنهاية زي شكل الإبرةthis
involves the progressive dilution of an inoculum
of bacteria or yeast بيكون عندى بالأساس في طبق
بكتيريا أنواع مختلفة أو yeast أنواع مختلفة ماعليه
غير أخد بسكينة واحدة وأزرحها على طبق فاضي وهك راح
تتخفف العينا عنده هيصير dilution راح أحطها وأزرحها
على ال surface وهذا ال surface فيه الأجار بيكون
البلات في ميديا متصلبة و بروح أزرع باستخدام ال
loop البكتيريا عليها the aim of the procedure ايش
الهدف من الاسترك بلات انه بحصل على single isolated
pure كولونيه pure يعني من نوع واحد من البكتيريا
الخطوات من واحد لعشرين طبعا هاي مش راح اطلبكم فيها
انما هي كشغل عملي فانا بدي أشرحهم حاليا ايش اللي
بده يصيربالأساس راح أشتغل اللي هي aseptic
technique هيكون في عندي لهب flame تمام هيكون فيه
loop و فيه طبقين طبق فاضي و طبق تاني فيه بكتيريا
مختلفةشو بدي أعمل؟ اللوب بدي أعقمه كيف بتعقم
اللوب؟ بحطه على الهيت لعندمي يصير redness لونه
أحمر طب هل عضوه بمجرد ما صار أحمر بدي أاخد فيه ال
colonies؟ طبعا لأ الحرارة high ممكن تقتل البكتيريا
فباجي أزرحها مش راح يصير عندى نمو فإيش بدي أعمل؟
بعد ما أعقم بدي أستنى ثوان شوية بس بعدين بروح أاخد
كيلونة واحدة كيف بدي أاخد الكيلونة؟ بفتح الطبق
زاوية 45 مش لازم أفتحه على الآخرباستخدام اللوب بس
باخد كوني واحدة قولنا بسكر الطبق و بروح على الطبق
تبعي الطبق الفاضي بدي أتخيل هو عبارة عن أربع أرباع
باجي على أول ربع و بأزرع فيه البكتيريا بشكل
continuous يعني مش راح أرفع اللوب خالص رايح جاي
بضني أزرع أزرع لعين ما يخلص أول ربع بغطي بالنسبة
للوب بروح عقمه تانييعني بيصير لونه أحمر بقصف عليه
شوية هل أروح أاخد كمان كيونة من الطبق اللي فيه
كيونيز؟ لأ أنا قلت كيونة واحدة بتكفيني، بدي أخففها
الهدف بدي أخففها عشان أحصل على pure كيونة بروح
أدير الطبق الفاضي بزاوية 90 درجة وهيك راح أصل
للربع التانيتديرته وباجيب استخدام اللوب وبروح على
آخر الطبق الأول على آخر الرُبع الأول بعمل تلات
خطوط منفصلة باخد بكتيرا من الرُبع الأول آخره و
بعمل خط بروح ع مكان تاني و بعمل خط برفع اللوب و
بعمل كمان خط تالت بسكر بعقم اللوب لعندمي يصير لونه
أحمر بستنى لعندمي يبرد شوية و بعدين بلف الطبق
بزاوية 90 درجة وهيك راح أحصل على الرُبع التالت
رُبع التالت من وين ببدأ فيه؟ من نهاية الرُبع
التاني باخد بكتيريا و بوزحها كمان بعمل تلات خطوط
أو خطين منفصلين يعني بعمل خط و برفع اللوب بعمل خط
تاني و برفع اللوب هيك عامة العينة بتتوزع كان عندي
أكتر concentration كان للبكتيريا في الرُبع الأول
الرُبع التاني خففناها التالت خففناها أكتربسكر
بعقّم و بروح من الرُبع .. بديّر 90 درجة و من
الرُبع التالت بعمل زيك زاج و بعمل تلات نقاط بعيدة
عن بعض من نهاية الرُبع التالت بعمل زيك زاج و تلات
نقاط بعيدة هو بالتالة بيقول راح تطلع عندك الكلن من
نوع واحد في الرُبع الرابعهتكون colonies بيور هذه
هي اللي راح أخد منها و راح أشتغل عليها ال
biochemical test لو أخدت من الربع الأول ممكن يكون
عندى أكتر من نوع من البكتيريا لكن الربع الرابع على
الأكيد هيكون نوع واحد و التالي بأشتغل عليها ال
biochemical test
هك خلصنا ال spread blood ركزوا معايا قولت ال
spread blood باخد الكولاناز وبعملها تخفيف أما ال
bore blood و ال spread blood الأثنان باخد فيها
brothما تنسوا هالشعلة الاسترك بلات قلنا بستخدم
فيها loop مع كولونز نيجي ع البور بلات البور فاكرين
زي ما انا قولت بأول معمل انه هيكون في عندى عينة
broth سائلة بروح أخدها و بقصب مقدار بسيط منها في
قاع الطبق الفاضيفوق العين انا بروح اصب الميديا
اللى بتكون liquid بستنى عليها اللى عندك ما تتسلم
هلاحظ ان البكتيريا راح تنمو عندى فوق وفي الميديا
وتحت لكن اكتر اشي هتكون نامية جوا الميديا وعدد
قليل هيكون نامى فوق لكن الاختلاف بين البكتيريا او
الكلنز اللى نمت فوق ونمت في الميدياواللي تحت هو
الـ Size فالأكبر Size هيكون اللي نمت على سطح، ليش؟
صار في عندها مجال أكبر إنها تكبر في الـ Size تمام،
a bore plate is one in which a small amount of
inicula مفروم الـ broth culture الـ broth culture
يعني، على سبيل المثال، أخدت عينة اللبن، بدي أشوف
قداش فيها البكتيريا، فأخدت 25 جرام من اليوغردخففته
باستخدام 225 مل ديستيل بوتر أو normal saline صار
عندى التخفيف 1 ل10 اللى هى 25 على 25 زائد 225 أو
20 تمام بروح أخد مقدار من هذه البروت وليكن مثلا
100 مايكرو لتر من عينة البروت وبحطها داخل تيوب
وهذا التيوب بقصب عليهأجار هيكون molten بالأول
وبعدين هيتجمد هلاحظ أن ال colonies بتلموا في اليوب
تحت وفي النص وفوق لكن أكتر إشي هتلموا على سطح نفس
الإشي بقولي ممكن أاخد من ال birth culture أخد 100
microliter من العينة أحطها في طبق فاضي و أصوب
عليها ال media و أستنهي لعند ما تتسلب هلاحظ نمو ال
colonies فوق و تحت و بالوسط
Poor plates allow microorganism to grow both on
the surface، هتنمو على السطح، and within the
bottom، within the medium، and in the bottom كمان
برضه، جوا ال medium، و بتحت كمان، في السطح، و جوا،
و تحتmost of the colonies grow within the medium
أكتر إشي هلاقيها تلمو داخل ال media and are small
in size هتكون ال size لإلها صغيرة ليش ما إلها
مساحة مافي مجال إنها تلموالجميع اللي بينمو على
السطح هيكون عدد قليل هو اللي بينمو على السطح هتكون
نفس الـ size و نفس المظهر فيما لو أعملناها بطريقة
الـstrike plate لو زرعناها على السطحية بطريقة
البكتيريا الهوائيةلياش إنه هيصار إلها كده في مجال
إنها تلمُك ويزداد الـsize ده إلها بقول إذا كانت
dilution معروف وليكن مثلا 1 من 10 حضرناها كفي
العينة الأصلية 1 من 10 عن طريق 25 جرام من اليوغارد
على 25 زائد 225 من الـdiluent
and volume of inoculum usually واحد من عشرة
centimeter مكعب أو ميت أو ملي لتر لو
كان ال dilution واحد من عشرة وكان ال volume اللي
أخدته من ال broth وزرعته على الطبخ كان واحد ملوانا
عديت الـ coolness بتاعون البكتيريا اللي لمات
فبالتالي بكل سهولة بقدر اعرف الـ concentration
للبكتيريا من خلال القانون التالي الـ concentration
يساوي N على S ضرب Dالـ Concentration هو التركيز
للبكتيريا في العينة بساوي الـ N هو عدد ال colonies
اللي عديتها مقصوم على S ضرب D دي هي ال dilution
واحد من عشرة و ال S هي قداش أخدت volume من ال
broth و زراعتها على الطبخ اسمها ال volume blated
شرط أساسي ال volume blated يكون بواحدة المل لو
كانت مثلا meat micro هتكون واحد من عشرة milفلازم
تتحول ممنوع تحلوا أي سؤال بوحدة ال micro letter
لازم تكون ال volume بليه أو ال اس بال milliliter
بالنسبة لل procedure من واحد لتسعة نفس اللي قولتها
note the base of the plate must be covered لازم
يكون القاع للطبقامغطى بالميديا، ليك بنعمل
agitation ونحط من 15 ل20 مليلتر اجار مست not touch
the lid، مش لازم انها تكون بتلامس الغطا ال surface
must be smooth with no bubbles، انه لو كان فيها
bubbles، بنتخلص منها من خلال ال flames using a
spreader، spreader معناه اشي بيوزع، بيقول لي لو
كان عندي طبقة و هالطبقة في ميديا و متصلبةروحت جيبت
ال broth برضه كمان high broth من ال broth culture
حطيت مقدار معين في نص الطبق باستخدام ال by bit
مثلا حطيت meat micro من ال broth حاطيتها في نص
الطبق بحاجة انه اوزحها على كل الطبق شو بستخدم؟
بستخدم حاجة اسمها spreader او اسمها L shape شكلها
عامل زي شكل القلو هي بتكون من الإزازةقبل
لاستخدامها شو بدي أعمل؟ بدي أعقمها، هيكون في cup،
في 70% كحول، بأحط عند القاعدة، بحط .. بحطها في
الكحول و بعدين بمررها على اللهب باجي على نص الطبق
و بوزع ال broth لاستخدام القلشsterile spreaders
are used to distribute iniculum over the surface
of already prepared agar plate يعني هو هيكون agar
موجود و جاهز متصلبة راح يكون حاط فيها إبرث وهدي
هتوزع البرث على الطبق wrapped glass spreader may
be sterilized in a hot air oven ممكن نغطيها ال
spreaderبعدين أحطها في الـ oven و هيك بتتعقّم ممكن
أعقمها من خلال flaming with alcohol it's advisable
to use agari plates that have a well-dried surface
so that the nicroma dries quickly بقولي الأفضل أنه
أستخدم الطبق أن يكون ما صار condensation والميه أو
قطرات الماء ما نزلت على الميديا فبدي ألاحظ أنها
تكون ناشفةطيب فيما لو لاحظت أنه صار فيه
condensation و المي كانت نازلة على ال media شو بدي
أعمل؟ بعملها ال drying باستخدام أني أحطها على ال
incubator درجة حارة 37 for several hours تمام مثلا
ممكن أحطها و أرجعلها تاني يوم و هيك بلاقيها أن كل
المي اللي فيها نشفت أو ممكن أحطها في ال hot air
oven من درجة حارة 55 ل 65 من نص على ساعة
و هيك راح نتخلص من المي الموجودة على ال media فى
حاجة اسمها ال spread blight هى طريقة لها الزراعة
اسمها spread blight او lone blight بيكون انا
بالاساس زارعة البكتيريا عندى فى ال growth culture
بروح بجيب cotton swab ايش عامل زى شكل نكاشات
الدنان هى طبعا لازم انه اعقمهم بروح ألفهم ابسوا
الفان و بعقمهمبتعقمهم باخد واحدة منهم و بحطها في
الـ broth ال media ال broth اللي عنده اللي فيها
العينة بعدين بحطها على الطبق و بصير أدهان و بوزع
كل الطبق continuous هذه الطريقة بستخدمها أو
بلجألها في حالة المضادات الحيوية بدي أشوف هذه
البكتيريا مقاومة أو حساسة لل antibiotic headشو بدى
يصير قولنا الطبق هيكون فيه agar متسلب تمام بروح
بجيب ال cotton swab من ال media الى ال broth و
بدهن على الagar عندى بروح أستنى تقريبا نص ساعة
لعند ما تجف بعد نص ساعة بجيب أقراس ال antibiotic
باستخدام الملقطة بروح أحطهم على ال media بس قبل
أحطهم على ال media لازم أكون عاملة لهم مكان
فباستخدام التب بجي أخذق ال mediaتمام بروح بحطها و
بعد كده بروح أعملها incubation باجي تاني يوم بشوف
هل البكتيريا حوالين هاد القرص نمت ولا لأ لو نمت،
بعناتها البكتيريا resistance يعني ما بتتأثر بال
antibiotic head لو لاحظت تاني يوم أنه صار في zone
of inhibition يعني ماكان في نمو خالص مع أن الكلام
البكتيريا sensitive يعني حساسة لل antibiotic head
فمن خلال هذه الطريقة الدكاترة بيعرفوا إيش ال
antibiotic إن البكتيريا مقاومة لإله وإيش حساسه
لإله على أساس بيعطي المريض العلاج
الـ Spread blades أو اللون بلاد should result in a
culture spread evenly over the surface of the
growth medium راح اوزحها شكل متساوي هتكون
continuous باستخدام ال cotton swab this means that
they can be used to test ايش الهدف منها الهدف انه
بدي اختبر ال sensitivity للبكتيريا to many
antimicrobial substancesfor example إيش ممكن شغلات
إلها مفعول ضد الميكروبات؟ mouthwash اللي هو غسول
الفم ممكن أستخدم يعني بدل الأقراص ال antibiotic ال
garlic ممكن أستخدم و أستخلص التوم و أحطه في
الفرغات و أشوف تأثيرها على البكتيريا، هل البكتيريا
هي حساسة أو مقاومة لإلهم؟كمان الـ disinfectant و
ال antibiotic الـ spread plate can be used for
quantitative work يعني هاي طريقة من طروج ال
quantitative ليش بالنهاية راح يطلع بكتيريا و راح
قاعدها if the nucleum is a measured volume usually
measured النيكلون المقصود فيها اللي هي ال S في
القانون يعني ال volume بلغت لو كانت واحد من عشرة
ملوكان عندى ال dilution معروف وبروح اعد ال kidneys
و بطبق بالقانون و هيك بعرف قداش عندى ال
concentration ال procedure من 1 ل 16 نفس اللى
قولتها في note this operation must be carried out
quickly to minimize the risk of contamination لما
بدي اجى اوزع ال broth على ال اجار لازم اعملها
بسرعة لحتى امنع ال contamination