السلام عليكم ورحمة الله وبركاته نستكمل باقي معامل
الـ Food Microbiology ونبدأ اليوم بالمعمل التالت
هو بعنوان Media Preparation Sterilization and
Disinfectant زي ما بتعرف أنه فيه بكتيريا بتكون
موجودة داخل أجسام الكائن الحي معناته هيبتستهلك من
المواد الغذائية الموجودة داخل أجسام الكائنات الحية
طيب لو كنت بحاجة إنه أتعرف على هذه البكتيريا
وأعزلها وأعمل عليها الـ Biochemical Test معناته
لازم أنميها داخل المختبرداخل المختبر يعني خارج جسم
الكائن الحي يعني لازم أنا أوفرلها المواد الغذائية
اللي بتحتاجها للنمو فهذه المواد الغذائية بيسموها
الـ media فالـ media هي كلمة جمع مفردها medium
exactly زي كلمة bacteria مفردها bacterium ال media
هي الأوساط الغذائية اللازمة لنمو البكتيريااليوم
بدنا نشوف كيف بدنا نحضر هذه الـ media بداية
الشركات المصنعة بتجيبنا الـ media على شكل powder
هذه الـ powder بتكون موجودة داخل bottles شو بدي
أعمل؟ أول ما أشوف ال bottles بدي أطلع على ال
instructions أو التعليمات الموجودة عليها من برا
هيكون مكتوب عليها طريقة تحضير الـ media على سبيل
المثال، عندي media اسمها الـ SSA مكتوب على الـ
instructions 52 جرام in one liter، شو المقصود
فيها؟ أصدوا إن 52 جرام من البودر، بحط عليها 1 لتر
distilled waterكيف بدي أحضر أو كيف بدي أجهز الـ 52
جرام باودر؟ بقولّي، حيكون في عندك ميزان، راح أحط
عليه cup فاضي، وبهيك راح تطلعلي قراءة ال cup ما
بديها، لإن هي ما بتلزمني، فبصفر عليها باستخدام
spatula، بصير أحط من ال powder داخل ال cup، لعد ما
أصير عندي القراءة 52 جرام، معناته أنا كده وصلت
للوزنة اللي بديهابروح أخد هاي الوزنة و بحطها داخل
الـ flask هاد الـ flask لازم يكون مغسول بالمي
وبالصابون بالـ distilled water تمام، ضايل عليّ
أجهز الـ 1 لتر distilled water بروح على المختبر أو
على المكان اللي فيه تحضير لالميديات
بدور على سيلندر يكون حجمه مناسب للحجم المكتوب على
الـ instructions فبدوا 1 liter يعني ألف مل فبروح
أدور على السيلندر بحجم ألف مل بغسله بالمي والصابون
وبعدين بالـ distilled water بحط عليه الـ distilled
water اللي عند العلامة اللي هي الألف ملبعدين بصير
أضيف ديستل واتر بالتدريج على ال flask كل ما أضيف
شوية من ال ديستل واتر بحرك ال flask بأضيف و بحرك
لعندما تخلص كل ال ديستل واتر بالنهاية هلاحظ أن
مشكلة ال powder دابتطب بدي أدوبها بروح أحط الـ
flask على الـ distilled water على ال hot plate
عفوا ال hot plate هذا نفس المر معكم في معمل
الأنزجة ال hot plate له مفتاحين مفتاح خاص بالحرارة
مفتاح خاص بالحركة لما أحط ال flask على ال hot
plate بحط جواته قطعةاسمها Magnetic اللي هي مغناطيس
بعدين بأشغّل مفتاح الحرارة الحرارة بتاعة الـ hot
plate عندها القدرة إنها تساعد على دوبانية ال
powder هاي واحد تاني شغلة لما أشغّل مفتاح الحركة
هيصير المغناطيس اللي جوا بتحرك وبالتالي هيساعد على
دوبانية ال powder كمان طيب كيف بدى أعرف إنه ال
media كده خلاص دابت تماما؟ بتطلع أول إشي على ال
solutionلو لاقيت الـ solution turbid يعني عكارة
فيه معناته لسه ما دابت إيه لو لاقيت الـ solution
clear معناته كل الـ media دابت كل الـ powder داب
في الـ distilled water هى هى أول شغلة الشغلة
التانية بتطلع على جدار لـ flaskلو لاقيت لسه فيه
حبيبات معناته ما دابت ال media لو لاقيت إنه الجدار
نظيف زي كأنه مغسول معناه الكلام إن ال media دابت
طيب دابت ال media بعد هيك بروح أجيب Sullivan و
بغطي فوهة ال flask بالتالي
بنروح لخطوة ال sterilization اللي هي التعقيم حسب
مش كل ال media بتحتاج إلى تعقيمإن أحطها بالـ
Autoclave هذا الأشي باعتمد على نوع الميديا وحسب
المكونات اللي فيها لإنه في ميديات ما بتقدر تتحمل
درجة حرارة الـ Autoclave وبالتالي مكونات هذه
الميديا بتتكسر وبالتالي هذه الميديا مش هتكون فعالة
فحسب نوع الميديا هل بتحتاج إلى تعقيم أو لا عسب
المثال هذه الميديا كانت بتحتاج إلى تعقيم قلنا
بنغطفوها تلف لاصق بالسلفان وبعدين بروح أحطها بالـ
Autoclaveالـ Autoclave زي ما انتوا عارفين بيعمل
sterilization يعني تعقيم تعقيم هو القضاء على جميع
أنواع ال micro organism بما فيها الـ Spars الظروف
اللي بتوفرها ال Autoclave أول إشي بالناحية ال
temperature 121 Celsiusمن ناحية الـ «Brusher» 15
PSI فمعكم واجب «PSI» هى اختصر لشو من ناحية الـ
«Time» 15 Minutes قلنا إيه بدي يصير، هيكون في شاشة
على جهاز الـ «Autoclave» هتبدأ الـ «Temperature»
إنها ترتفع لما تصل 121، هيبدأ يحسب 15 Minutes
خلصوا الـ «15 Minutes» وبهيك درجة الحارة هتنزل
بالتدريج تمام، خلاص، بعد كده طلعت الـ «Flask» من
الـ «Autoclave»بقولّي ما هتصبي و هي سخنة لعند ما
أصير درجة حرارة ال media 45 بابدأ أصب طب كيف بدي
أئيسها؟ من الميديا اللي كانت معقمة صعب أفتحها و
أحط فيها ترمومتر و هيك حيصير فيه contamination
فبقولّي 45 هي بتحسيها بإيدك إذا قادرة إنك تمسكي
لـflask معناته خلاص إن هيك وصلت لدرجة حرارة 45ما
بنفع أطول عليها على الآخر لأن ال media ممكن بعد
كده أنها تتسلب فلما تصير 45 ببدأ أنه أنا أصبها
طريقة صب ال media بتكون إما في أطباق plate أو
بتكون في tubesبالنسبة للأطباق بالأساس ابتجينا
الأطباق plastic هي يعني disposable يعني بس استخدام
واحد وخلاص لكن في نوع تاني من الأطباق بتكون من
الإزاز هاي بقدر أحطها بالـ autoclave وأعقمها
وأستخدمها تاني وتالت ورابع فإحنا راح نعتمد عنا في
ما عملنا هي الـplastic ابتجينا بتكون كلها موجودة
في packet plastic مسكر معناه لكلام إنه هاي الأطباق
معقمةبروح أفتحهم وبأطلحهم بروح أحط صفطة فوق بعض
تقريبا عشرة لازم شغلي بتتبع فيه الـ Aseptic
technique يعني بدي أشتغل عندي لهب بحيث أن ال
environment أو ال working area اللي عندي هتكون
نظيفة بحيث أنه مايصير أي contamination الأطباق
عندي وعندي كمان ال flask بروح أشيل السلفان اللي
علىلفلسك و بعقم فوهته عند اللهب بعد هيك بروح لآخر
طبق عندى من تحت برفع الغطايا شوية مابرفحها لآخر
مشان مايصير contamination برفحها شوية بس و بعدين
باليد التانية بقصب ال media و بعد ما قصب بعمل
agitation للطبق agitation يعني تحريكخلصت حرقته
بروح أعقم فوهة الفلوسك تاني وبغطيها بالسلفان قداش
الكمية اللي لازم أضيفها من ال media داخل الطبق
بقولي بضيف من 15 لعندي 20 سم مكعب أو يعني ملي لتر
هي هي تقريبا هتكون لتلت الطبق أو لربعه طب ليش بعمل
agitation مشان أحرك ال media على القاع بحيث أنه
تكون موزعة بشكل متساويالشرط عند الصب ما يكون الـ A
عندي فاضي وشرط تاني أن ال media ما تلامس الغطاية
يعني ما أضيف media بشكل كتير كبير بس على قد أنه
ربع ال plate تمام صبيت آخر واحد من تحت بعدين بطلع
للي فوقه برفعه شوية طبعا الصفة فوقها عددك هتكون
برفع شوية بروح أعقم الفوها بقصببسكر الغطاية وبعمل
agitation بعقم فوهة الـ flask تاني و بغطيها تمام
بروح للتالت من تحت برفع الغطاية مع كل الأطباء اللي
فوقه بكون ام عقمة ال flask بصب بسكر agitation و
بعقم الفوهة تاني و هكذا تمام هيك صبيت كل الصفطة
اللي عندىباستناهة اللي عندنا تتسلب لأن هاي أجار
يعني هيتحول إلى سلطة اتسلبت راح أعمل labeling
باستخدام ال marker طب ال labeling بالكم هيكون على
السطح من فوق يعني عن الغطاية ولا هيكون على الدهر
ال labeling بعملها على دهر البلاد ال labeling شو
بدي أكتب فيه بحكي لي أكتب في اسم ال mediaطب ليش؟
لأن في كتير ميديات بتتشابه أو لها نفس اللون زي ما
قلنا قبل إنه في ميديو ممكن إنها تنمي لجرام
positive ممكن ميديو إنها تنمي لجرام negative فبدي
أكتب اسم الميديو مشان أقدر أستخدمها أستخدم صحيح و
أعزر من خلالها البكتيريا الصحيحة طيب، في مشاكل
ممكن تصيرعند صب الميديا لو أنا بصب الميديا تكون
عندي air bubbles في القاعات في الأجار، شو ممكن
أعمل؟ طبعا لازم نستثنى فكرة إن إحنا نكب الميديا،
هاد مش حال خالص الحال لو اتكون air bubbles، بنمرر
ال flame على الأجار لما أمرر اللهب عليها وهيك راح
تنبعط ال air bubblesطيب، شو ممكن يصير لو صبيتي الـ
media و هي سخنة كتير؟ يعني كانت درجة حارة أكتر من
45 أكتر من 45 يعني هيكون فيه بخارمة كتير بخارمة
راح يتلامس مع الغطايةوبالتالي، حيث كثف، هيعمل
Condensation وحتى تساقط قطرات الماء على الـ Media
طيب، لما يصير فيه ميّه على الـ Media فهيك لما بدي
أجي أسرع البكتيريا، هتكون البكتيريا عندي عايمة،
فمافيش عندي مستعمرات، فصعب أنه أعمل isolation
للبكتيريا إيه الحل؟ قلنا ما بتكب الـ Media الحل
إنه بمسك الطبق و بحطه على الـ Incubator درجة حره
37، عندها القدرة إنها اتجف في الميه اللي هياللي
على البلات طيب احنا قلنا لما نطلع ال media من ال
autoclave بدي أصفر عليها لإن ما تصير درجة حرارته
45 و أنا قادرة إنه أمسكها بإيدي و أتحملها طيب مثلا
أنا كنت عمالة بأستنى فيها فالتهيت عنها و نسيتهاأو
مثلًا إن حطيتها لعندنا تبرد وروحت روحت على البيت
تذكرتها تاني يوم هنيجي على الـ flask هلاحظ إن الـ
media متصلبة جوا الـ flask شو الحل؟ قولنا ما بنكب
الـ media شو بدي أعمل؟ بدي أسيحها تاني «remelted»
بدي أعملها يعني بدي أسيح الـ media تاني بحطها إما
على الـ hot plate وهيك الـ media هتسيح طبعًا مش
بحاجة إن أنا أعقمها لأن أنا أساسًا يعني مافتحتها
فضيلة إمعاقمة من أول مرةممكن أحطها على الـ water
bath و التالي بتسيح ممكن أحطها في الـ autoclave
تاني و هتسيح أو ممكن أحطها في الـ microwave هاي
كلها شغلات ممكنها إنها تسيح ال media بعد ما تتصلب
قبل لأصبع يعني هي لسه في ال flask ال hot plate ال
water bath و ال autoclave و ال microwave
قلنا كل مشكلة إلها حل كب ال media مش حل ال media
لو اتسلبت بسيحها تاني ال media لو فيها مي بجففها
لو فيها air bubbles بتخلص من ال air bubbles
باستخدام ال flame طيب قلنا الأطباء بعد ما تتسلب ال
media فيهم بعملهم labelling على دهر البلاد أعملت
labelling وخلاص تمام هلأ بحاجة إن أنا أحفظها يعني
بدأ أحط البلاد في التلاجة كيف بدي أحطهم؟بحطهم في
نفس الظرف اللي كانوا جايين فيه في نفس الـ bucket
الـ plastic بحطهم الأطباق مقلبين يعني الغطاية لتحت
بحطهم بالتلاجة ليش لتحت؟ مشان ما يصير condensation
مقاطرات الماء تيجي على ال media وتأثر على زراعة
البكتيريا هيك خلصنا من طريقة صب ال media في الـ
plates نيجي على صب ال media في ال tubesنفس ما
قولنا أول إشي باجيب الميزان بحط عليه ال cup بصفر
على قراءة ال cup بعدين بستخدم ال spatula بأوزن 52
جرامبحطها في flask مقصود بالمي و بالسابون و
بالـDistilled water بعدين بروح لسيرندر مقصود بالمي
و السابون و الـDistilled water بحط فيه ألف مل
Distilled water و بصير أضيف على الـpowder و بحرك
بالتدريج تمام، بعد هيك بحطها على الـhot plate
بشغّل المفتاح حين بحط جواها الـmagnetic لعند ما
تدوب بالكامل و بعدين هذه الـmedia مش راح أحطها
بالـautoclave، ليش؟لأن الـ tube هي من الـ glass
يعني بأستخدمها أكتر من مرة فهي ال tube مش معقمة
أساساً و ال media عندي مش معقمة فليش لا أعقم أول
إشي ال tube و بعدين أعقم ال media لأ فبصب ال media
في ال tube و بعقمهم مرة واحدة و هيك بأفرع حالي
الوقت فببدأ في الصب في ال tubeبقول ليه الـ tube
بتحتاج لخمسة مل أو خمس سنتمتر مكعب من ال media
باستخدام الـ syringe أو باستخدام الـ pipet بصير
أحط خمسة مل على كل الـ tube قولنا في البلات بنحتاج
من خمستاشر لعندي عشرين مل أما في الـ tube خمسة مل
تمام حطيت في الـ tubات بحاجة أنه أنا أسكرهم بعد
هيكالـ tubes عندي نوعين، في نوع بيكون عنده فوهة من
فوقله زي أخطوط أو محززة، معناته هاي بتحتاج إلى
غطاية باللفها لف مشان تتسكر أو ممكن يتكون أن فوهة
التيوب تكون ملساة فبسكرها بالقطن فبعد ما صبّعنا ال
media إما بسكنها بالقطن أو بالسواب أو ممكن أسكنها
بالـ screw cap اللي هي الغطاية اللي باللفهابعد كده
بدخلهم في الـ autoclave وهيك بحقق ال media أو بحقق
ال tubes بس بقوللي في ملاحظة أنه لما تستخدم ال
screw cap ما تحذقها على الآخر لما تدخليها في ال
autoclave ليش؟ لأن ممكن الضغط تبع ال autoclave
بيخلي ال tubes إنها تنفجر فما بحذقها بدخلها بال
autoclave لما تطلع من ال autoclave فبحذقهاتمام طب
كيف بدي أحط ال tubes في ال autoclave؟ بقوللي
بالأساس ال autoclave بيكون فيه سلة بحط فيها ال
flask ال beaker أي إشي بدي أحكمه طب لو حطيت ال
tubes في السلة هاي هتوقع طب شو بدي أعمل؟ ال tubes
بروح أحطها في راك و بصفطهم في الراك هاد و بعد كده
بغطي راك بال tubes بالسلفان و بدخلهم بال autoclave