يكون positive، إذا كان يحتوي، وإلا هيكون negative فكيف
الـ principle مبدأ عمل الفحص أنه بيجي عند حمض أميني
amino acid with aromatic ring بيحتوي على حلقة
بنزين بحط عليه concentrated nitric acid
concentrated nitric acid HNO3 في وجود قاعدة قوية
زي الـ NaO2 في وجود NaO2 ليش هيجي يعمل الـ nitric
acid لحمض الأميني اللي بيحتوي على حلقة البنزين؟ بيعمل
Nitration of Benzene Ring بيضيف NO2 على حلقة البنزين Nitration of
Benzene Ring بيضيف NO2 على حلقة البنزين Nitric
Acid بيضيف NO2 على حلقة البنزين بيسميها Nitration
of Benzene Ring إذن هو Amino Acid with Benzene
Ring زائد Concentrated Nitric Acid مع Concentrated
HNO3 في وجود NaOH بيصير Nitration of Benzene Ring
حلقة البنزين بتحتوي على لون أصفر، إذا صار لون أصفر
إذا positive، وإذا ماصار لون أصفر إذا negative، إذا لا يحتوي على حلقة البنزين
في الملاحظة اللي تحت بيحكيلي عن الأحماض
الأمينية اللي بتحتوي على حلقة البنزين، مين هم الأحماض
الأمينية اللي بتحتوي على حلقة البنزين؟ هم ثلاثة، في
الـTyrosine وTryptophan وPhenylalanine، ثلاثة أحماض
أمنية فقط بتحتوي على حلقة البنزين، هم الـTyrosine
وTryptophan وPhenylalanine في حالة التيروزين
والتريبتوفان بتكون activated، contain activated
حلقة البنزين بتكون نشطة، فبتقدر تتفاعل
بسهولة مع الـnitric acid مع الـconcentrated nitric
acid بيصير لها نيتراشن، بيعطينا لون أصفر، لكن في حالة
الفلن الألانين لا تتفاعل مع نيترك أسد لأنها بتكون
حلقة البنزين غير نشطة، فمش هيتفاعل ولا هيعطينا لون أصفر
إذن الأحماض الأمينية الثلاثة اللي عندها حلقة بنزين هم
التيروزين، Tryptophan، فين الألانين؟ ولكن مين النشطة
وهيعطينا positive مع فحص ال Xanthopretic test بس
التيروزين والـ Tryptophan، أما الفين الألانين هيعطينا
negative، مش هيتغير اللون لأن حلقة البنزين غير نشطة
في فحص الـ xantoproteic test من هيعطينا positive
فقط التيروزين والتريبتوفان، وكمان أي بروتين بيحتوي
على التيروزين أو التريبتوفان في تركيبه، فالبروتين
هو عبارة عن مجموعة من الأحماض الأمنية مرتبطة مع
بعضها البعض بروابط ببتيدية، إذا كان أحد الأحماض
الأمينية هذه تيروزين أو تريبتوفان أو الاثنين مع بعض
هيعطينا positive، أوضح بمعادلة إن الـ Thyrosine مع
Concentrated Nitric Acid، مش مهم إن الـ Structure
إنه بيعطينا Nitration of حلقة البنزين، Yellow Color
وإذا تفاعل برضه الـ Tryptophan مع Concentrated
Nitric Acid، هيصير برضه عملية Nitration of حلقة البنزين
وهيعطينا Yellow Color، لأن الـ Thyrosine والـ
Tryptophan بيحتوي على Activated Benzene Ring، لكن لو
تفاعلنا الفل الأليان مع الـ Concentrated Nitric
Acid ما بيتفعلش، مش هيعطينا Yellow Color، ليش؟ لأن
حلقة البنزين اللي موجودة في الفل الألانين غير
نشطة، من أكثر
طب كيف خطوات العمل؟ خطوات العمل بجيب أنبوبة، glass
tube، بحط عليها 1 مل من الحمض الأميني أو من
المحلول اللي أنا أعطيتكياه، أنا مش عارف حمض أميني
أو بروتين، المهم محلول اللي أنا أعطيتكياه، بتحط منه
1 مل، بتحط عليه 1 مل من ال nitric acid من ال
HNO3، بعدين بتسخينه على اللهب، لما نسخن على اللهب
بنحطه في الـ rack يبرد، بعد ما تبرد شوية الأنبوبة بنضيف
عليها 2 مل من ال NaOH من القاعدة، ليش هذه
ال NaOH؟ عشان تزود شدة اللون، بنضيف NaOH
لزيادة شدة اللون، والله إذا تغير اللون إلى أصفر
إذن هذا حمض أميني أو بروتين بيحتوي على حلقة بنزين
إذا ما تغيرش اللون، إذن لا يحتوي على حلقة بنزين
الفحص اللي بعد هيك هو الـ Hopkin Cole أو الـ
Glyoxylic Acid Reaction، اللي هو اسمها؟ Hopkin
Cole أو Glyoxylic Acid Reaction، إيش الهدف من
الفحص؟ لكشف عن وجود التريبتوفان، بيكشف عن
التريبتوفان، مش معناه التريبتوفان، لأنه هذا بيدور على
حاجة بنسميها Indole Group، هي مجموعة موجودة بس في الـ
tryptophan، إذا موجود ال tryptophan هيعطينا
positive، إذا مش موجود هيعطينا negative، فهو
positive مع ال tryptophan أو أي بروتين بيحتوي في
تركيبه على ال tryptophan، هبقى الـ principle المبدأ
إنه بجيب الحمض الأميني اللي عندي ال tryptophan أو
البروتين وبضيف عليه Glyoxylic Acid Reagent مع H2SO4
concentrated sulfuric acid، بتكون لي هذا الـ
Sulfuric Acid هي مسؤولة عن تكوين، to formation of
violet ring، بتكون لي حلقة في الوسط، بتفصل solution
من الأعلى لأسفل، بتكون حلقة لونها بنفسجي، violet ring،
الـ Sulfuric Acid بتكون لي violet ring، بتكون لي
حلقة لونها بنفسجي، إذا تكونت هذه الحلقة معناها إنه
الفحص positive، معناه إنه هذا المركب هو tryptophan
أو بروتين بيحتوي على tryptophan، إذا لم تتكون، إذا أنه
negative، لا يحتوي على الـ tryptophan، طب
كيف ال procedure في وقت العمل؟ بجيب الأنبوبة glass tube
بحط فيها 1 مل من ال solution من المحلول اللي
أنا أعطيتكياه سواء tryptophan أو غيرها وبحط عليها
1 مل من ال Glyoxylic Acid Reagent وبعمل mix
بجيب الأنبوبة وبحط عليها 1 مل من ال solution
مع 1 مل من ال Glyoxylic Acid Reagent وبعمل mix، بعدين
بمسك الأنبوبة بميلها بشكل مائل وبحط فيها من 3 إلى 4
مل من ال H2SO4 Concentrated Sulphuric Acid على
الجدار، بنضيف ال Sulphuric Acid وبشكل تدريجي مش
مرة واحدة وبحرص على إني ما أرجش الأنبوبة، بمسك الأنبوبة
بشكل مايل وبضيف على الجدار من 3 إلى 4 مل من ال
concentrated sulphuric acid بشكل تدريجي بدون رج
للأنبوبة، بعد ما أخلص بآعدل الأنبوبة شوية شوية بدون ما أرجها
بآعدلها، إذا تكونت عندي حلقة لونها بنفسجي، إذن هذا
positive، بيحتوي على الـ tryptophan، هو tryptophan،
يمكن أن يكون الـ tryptophan أو protein بيحتوي على
tryptophan، إذا ما تكونتش الحلقة، إذا الـ
negative، لا يوجد tryptophan، لا يحتوي على الـ
tryptophan
بس اللي بعد هيك هو ال Millon's test، ال Millon's test
هو للكشف عن وجود التيروزين، objective to detect the
presence of tyrosine، ليش؟ لأن التيروزين بيحتوي على
Phenol Group، هو بالذات ال Phenol Group اللي في
التيروزين، إذا موجود أنا تيروزين عنده هيعطينا
positive، إذا مش موجود هيعطينا negative، فهو
positive مع التيروزين أو أي بروتين بيحتوي على
التيروزين، غير هيك بيعطينا negative، إيش هي الـ
Phenol Group؟ هي حلقة بنزين مرتبطة بـ OH، Hydroxyl
Group Attached to Benzene Ring، إذا عندي حلقة بنزين
مرتبطة بـ Hydroxyl Group، فهذه بنسميها Phenol
Group، وهي موجودة في حالة التيروزين، بيحكي للـ Millon's
Reagent عبارة عن مكونات بتحتوي على mercury وNitric
acid، HNO3 و Mercury، وهذول المكونين هم
toxic و corrosive و بسبب حروق ومُهيج irritant
فبدنا نتعامل مع ال Mercury reaction بحذر، طب إيش
الـ principle اللي
التيروسين مع الـMillon's reagent، حكينا الـMillon's
reagent هو عبارة عن مكونات Nitric Acid، HNO3، وMercury
مجرد ما أضيف الـMillon's reagent على التيروسين
بتيجي أول مكون اللي هو الـnitric acid بيعمل Nitration
لحلقة البنزين، بيعمل Nitration لحلقة البنزين الموجودة في
التيروسين، بعد ما يصير لها Nitration بتيجي الـ mercury
بيرتبط معها وبيتكون عندي لون أحمر طوبي، إذا إن هو
تيروسين مع Millon's Reagent وبيتكون عندي Nitrated
Tyrosine Mercury Complex، اللي هو التيروسين بيصير له
Nitration ومرتبط معه mercury، بنسميها Nitrated Tyrosine
Mercury Complex، شو لونه بيكون؟ بيكون لونه أحمر طوبي
إذا إن هو positive، إذا إن هو التيروزين أو أي
بروتين بيحتوي على التيروزين، نحكي للملاحظة أن كل
الـPhenol Group اللي بتحتوي، كل الـPhenol Group كل المركبات اللي
عندها Phenol Group اللي هي حلقة بنزين مرتبطة ب OH
هتعطينا positive مع Millon's Reagent، إن إحنا حكينا بس
طب إيش الـ principle
التيروسين، التيروسين وبضيف عليه Millon's reagent، التيروسين
مع الـ Millon's reagent، حكينا الـ Millon's reagent هو
عبارة عن مكونات Nitric Acid، HNO3، وMercury مركز، مجرد
ما أضيف الـ Millon's reagent على التيروسين بتيجي أول
إيه؟ أول مكون اللي هو الـ nitric acid بيعمل Nitration
لحلقة البنزين، بيعمل Nitration لحلقة البنزين الموجودة في
الـ Tyrosine، بعد ما يصير لها Nitration، بتيجي الـ
Mercury بيرتبط معها وبيتكون عندي لون أحمر طوبي،
إذا إن هو Tyrosine مع Millon's Reagent، بيتكون عندي
Nitrated Tyrosine Mercury Complex، اللي هو التيروسين
بيصير له Nitration ومرتبط معاه Mercury، بنسميها
Nitrated Tyrosine Mercury Complex، شو لونه؟ بيكون
لونه أحمر طوبي، إذا إن هو positive، إذا إن
هو التيروسين أو أي بروتين بيحتوي على التيروزين، بنحكي
للملاحظة أن كل الـPhenol Group اللي بتحتوي، كل الـPhenol Group، كل
المركبات اللي عندها Phenol Group، هي حلقة بنزين
مرتبطة ب OH هتعطينا positive مع Millon's Reagent، إن إحنا حكينا بس
من الأحماض الأمنية التيروسين هو
الوحيد اللي عنده Phenol Group، عنده حلقة بنزين
مرتبطة ب OH، لكن هل الطبيعة كلها في المركبات
الكيميائية كلها، فيش غير التيروسين صح؟ وفي الأحماض
الأمينية بس، ثاني فيه مركبات تانية عندها حلقة بنزين
مرتبطة بـ OH، لو جيت اشتغلت عليها الـ Millon's test
هتعطينا positive، طب على فرض أنا أعطيتك محلول
وحكيت لك شوفي لي إيش هذا المحلول، شغلي لي عليه الـ
Millon's، شوفي تايروسين positive ولا negative، فجيت إن أنتِ
اشتغلتيه وأعطاكي positive، إذن هي هتتوقع إنه مركب
بيحتوي على Phenol Group تمام؟ طب هل هو التيروسين ولا
مركب تاني؟ كيف بتتأكد هل هو التيروسين أو لا؟ لأن
في مركبات تانية بتحتوي على Phenol Group؟ بشتغل
فحص الـNinhydrin، مش الـNinhydrin أول فحص أخذناه هو
مخصص لـ Free Alpha Amino Group اللي موجودة في كل
الأحماض الأمنية، الـAmino Acid، أنا هشتغل فحص الـ
Ninhydrin، لما تشتغلي فحص الـ Ninhydrin إذا أعطاكي
positive إذن هو التيروسين، لأن حمض أميني بيحتوي على
Free Alpha Amino Group، إذا أعطاني negative إذن هو 172 00:11:55,830 -->
فغير قادر على كسر الرابط وأنه يتفاعل فهو negative
في حالة الميثيونين و positive في حالة السيستين
والسيستين وأي بروتين يحتوي عليه مهم إذا للـ
lead sulphide test أو الـ sulphur test اللي كاشف
عن ال sulphohydryl group الموجودة في الميثيونين أو ال
ميثيونين نيجاتيف لإنها not freeماشي ال principle
أني بجيب الحمض الأميني مثلًا سيستين أو سستيان بضيف
عليها 10% من ال NaOH في وجود حرارة heat بيعطيني
Sodium Sulphate بجيب سيستين أو سيستان مع 10% NaOH
في وجود حرارة بتكون عندي Sodium Sulphate بضيف
عليها 10% Lead Acetate بيعطيني حاجة بتسميها Lead
Sulphate الليد سالفايت هذا عبارة عن ال precipitates
لونه أسود، سيستين أو سيستان، مع 10% النيوهاتش في وجود
حرارة، بيعطيني Sodium Sulfate، بضيف عليه 10% ليد
أسيتات، بيعطيني Lead Sulfide ب precipitates لونه
أسود، يعني positive، يعني بتحتوي على سيستين أو سيستان
هنا بيوضح لي أن الميثيونين والسيستين الاثنين
بيحتوي على sulfur group بس ليش الميثيونين بس هي اللي
بتعطيني positive لو جينا لل structure الميثيونين
تشوفوا ال S و N مرتبطة في CH2 من جهة و CH3 من جهة
فهي مرتبطة من الجهتين وصعب تكسير هذه الرابطة
فبنقدرش نكسرها عشان تتفاعل ما يتفاعل فهي not free
أما في حالة السيستين فهي free هي ال S فوق
مرتبطة في H من جهة و free من جهة أخرى تقدر تتفاعل
وتحت معادلات لبرنسبل الفحص السيستين مضيف عليه
النيوهاتش في وجود حرارة بيعطيني صوديوم سالفايت
مضيف عليها 10% من lead أسيتات بيعطيني lead
سالفايت ال precipitate لونه أسوديكون ال recipe
اللي هو هنا اسمه كيف خطوات العمل؟ بحط 1 مل من ال
solution أنا أعطيتك إياه في تيووب بحط 1 مل منه على
1 مل من ال sodium hydroxide ده نيو هاتش مع خمسة
دروب من عشرة فالمية lead acetate بحطهم كلهم مع بعض
وبعمل math بعدين بحطه في ال water bath لمدة خمسة
دقائق بطلعه من ال water bath إذا صار لونه أسود فيه
راسب أسود is a positive يحتوي على ال system إذا
ما اتغيرش اللون is a negative ليحتوي على ال system