هم رحمة الله وبركاته اللي بنعمل التاسع بعنوان
isolation of Escherichia coli O157H7 in foods
لاحظوا احنا بنحكي isolation ما حكينا enumeration
مابدنا انعد، ليش؟ لأنه ال Escherichia coli لو كان
موجود كل واحدة منها بالfood بيكون ال food غير صالح
لل human consumptionمعناته العدد ما بيهمني على قد
ما بيهمني هل موجود إشريشيا كولاي O157L7 أو لأ طيب،
شو هما الـ O و الـ H اللي باسم البكتيريا؟ هدول
الإتنين يعتبروا Antigens الـ O هو Somatic Antigen
و الـ H Efflagellar Antigenفلاجلر معناته البكتيريا
عندها فلاجلة بتستخدمها البكتيريا للحركة يعني
الشريشة يقول الله O157-7 تعتبر motile
بالنسبة لـ الـ Objective هنعمل detection للإشريك
شيكولاي O157-L7 in food هنتعرف على الـ pathogenic
strains بناء على الـ biochemical و الـ
physiological characteristic للبكتيريا كمان هيكون
في rapid testing زي مثلا immunochromatographic
technique بتأكد من خلالها على وجود الإشريك شيكولاي
O157-L7 بالاعتماد على مبدأ antigen antibody
reactionالشريشة كولاي O15707 is an important
foodborne pathogen، food بنتقل عن طريق الفئة
بكتيريا تنتقل عن طريق الـ food causing symptoms
تعمل أعراض بتتراغح بين ميال ديارية لهوميرجيا
كولايزي اللي هو بيكون في نزيف في القلعون بالإضافة
لهوميرجيا كيوراميكا سندرام Most outbreaks and
sporadic cases have been associated with
consumption إيش الأسباب ممكن تعمل في إمراضية
بالإشريش الكولاي؟ وين ممكن تكون موجودة؟لو أنه تم
تناول food undercooked، غير مطهي بشكل منيح، خاصة
اللحم البقري، وبرضه كمان daily product منتجات
الألبان زي الـmilk-un-treated، يعني مصل ومعالجة،
يعني الحليب الغير مبسطرInfections due to
Escherichia coli O157 at seven لحظة يكون في
المكتوب Escherichia coli O157 عرفوها تلقائيا at
seven إلا لو كنت أنا معنية أن تكون نوع آخر فبكتب
Escherichia coli O157 not at seven are increasing
أنه العدوى بالبكتيريا هيبتزداد ومتواجدة في wide
ranges of food زي مثلاUnder cooked meat اللحوم غير
مطهية بشكل جيد، ال vegetables، الخضروات، السلطات
الخضار، ال coleslaw اللي هي سلطات الكرومبكمان acid
-based food زي القبل cider المقصود فيها عصير
التفاح الليغارد اللبن ال sausages اللي هي النقانق
microbiological guidelines for ready to eat food
الـ Standard تحكي مشان يكون الطعام جاهز أنه ناكله
أصالح للهيوم الـ consumption فالمفترض بالناحية
الاشياريش هيكون اللهي O15787 يكون عدد البكتيريا
Zero لإن كدنيا واحدة بتعمل disease، ان خمس وعشرين
جرامخمسة و عشرين جرام هاي اللي هي ال analytical
units هو خمسة و عشرين جرام أو خمسة و عشرين مل لازم
لما نيجي نفحصها في المختبر لحتى نحكي هذا ال food
صالح لل human consumption لازم مايكن في الشريشة
كلها الـ O157 ألا الـ 7 خالص most strains of
الشريشة كلها الـ O157 don't ferment sorbitol طيب
قبل اللي نحكي عن ال sorbitolلو سألت شو هم الـ
characteristics لـ Escherichia coli O157S7 نكون
عارفين أن Escherichia coli O157S7 هي من ضمن الـ
Escherichia coli العادية يعني هي من ضمن الـ Total
Coliform زي ما احنا عارفين كمان من ناحية المخطط
اللي أنا كنت عاملة حكيت في عقلات
Enterobacteriaceaeهذه تعتبر الـ Gram Negative بصي
اللاي قسموا الأوردنزم اللي فيها حسب اللاكتوز
لاكتوز فرمنتر ونون لاكتوز فرمنتر وكانت توتر كولي
و4 من ضمن اللاكتوز فرمنتر نشي على خصائص
الاشريشيكولاي O157S7 أول حاجة Gram Negative بعدين
باصي اللاي من ناحية اللاكتوز فهي لاكتوز فرمنتر طيب
لما بعمل fermentation لسكر اللاكتوز بطلع منه
produce acid with gas لإتنينكمان هي facultative
and aerobic بكتيريا وقولت قبل شوية إنها بتكون
foodborne pathogen كمان عندها flagella معناته هي
motile طيب لو بدي أميز البكتيريا الاشريشا كولاي عن
الاشريشا كولاي O15787 هل بينفع أستخدم ميديا
المكونكي المكونكي أجارالمكونكي أجار معروف أنه فيها
سكر اللاكتوز طيب، هل سكر اللاكتوز من خلاله بقدر
أنه أنا أميز الاشريشيكولاي عن الاشريشيكولاي
O157H7؟ الجواب لأ، ليش؟ لأن هما الأثنين بيعملوا
fermentation لسكر اللاكتوز، معناته ما بتقدر أنها
تساعد في التفرقة بين البكتيريات طيب، شو حكوا؟ شو
عملوا؟ راحوا عدلوا في ميدية المكونكيحكوا بدل ما
فيها سكر اللكتوز اللي مابيفيدني في التفريقة بروح
أستخدم سكر تاني هو سكر السوربيتول صار اسم ال media
سوربيتول ميكونكي بنحكي عنها أسمك سوربيتول ميكونكي
ولاحظوا أن الإشريشة كلها IO15787 ما بتعمل
fermentation لسكر السوربيتولأما الاشريشيا كولاي
بتعمل fermentation لسكر السربتور طيب المكونكي سواء
العادية أو الأسمك فيها الـ pH indicator هو هو نفسه
اسمه الـ neutral red البكتيريا لما بتعمل
fermentation لأي سكر بتطلع منها acid ال acid بتقلل
ال pH بيحول لون ال media إلى لون pink to red تمام
فالاشريشيا كولايسواء بالمقنكة أو بالأسماك سوربيتول
مقنكة هي أكيد هتعمل fermentation لالنوعين سواء
لكتوز أو سوربيتول هيكون اللون الكونيز بينكتوريد
طيب الشريشة كولاي O157R7 ما بتعمل fermentation
لسكر السوربيتول ما بتعمل fermentation يعني ال pH
هيكون basic يعني اللون هيكونcolorless لما يكون
colorless معناته هاي ميديا الشريشة يكون IO157H7
طيب الشريشة IO157H7 على الميديا المقنقة هيكون
لونها pink turret لإنها بتعمل fermentation لسكر ال
lactose لكن على الأسمك لونها هيكون colorless لإنها
ما بتعمل fermentation لالـ Sorbitol فاحنا بدنا
نعزل اللي هيكون لونها colorless على ميديا الأسماك
نرجع تاني معظم السلالات الإشريشيكولاي O157H7 don't
ferment sorbitol within 24 hours بقدر أن أستخدمها
ينهي عن non-sorbitol fermenter و أضيف على ال
characteristic الإشريشيكولاي O157H7كمان بقدر أضيف
إنها Beta-Glucoranidase Negative يعني ما عندها
أنزيم لـGlucoranidase وين مارى علينا هذا الانزيم؟
مارى علينا لما نحكي عن الـMUG لما يكون في عندى
عينة water بحط عليها الـreagent تبعي اللي هو
الـMUG وبقى أشوف لو البكتيريا عندها Glucoranidase
هيكسر الـMUG ولمّا أعرضها لـUV هيطلع لون فلوريسانت
معناته high Escherichia coliلكن زي ما بحكي بالـ
slide إن الـ O157A7 ما عندها الإنزيم هذا معناته لو
عندى عيلة water فيها أشريشا كولاي O157A7 بعرضها لـ
UV مش هيصير تغيير في اللون whereas most other
serogroups of أشريشا كولاي gave positive reactions
إن الأنواع التانية من الشريشة كولاي other than
الشريشة كولاي O157-S7 هتكون positive للسوربيتول
هتكون سوربيتول الfermenter وكمان positive منها
هتجي الوكريندياز يعني عندها الإنزيم الشريشة كولاي
O157 برضه S7 معناها is pathogenic to man المقصود
بالمانمش معناها المال، معناها الـ human هي ممرضة
للـ human has a low infective dose يعني مقدار بسيط
أو كمية بسيطة من البكتيريا بتعمل disease يعني ال
pathogenicity عندها عالية and laboratory acquired
infections have been reported المختبرات بمجرد ما
يصلهم إنه في infection بشري الشيكولاي O157H7 لازم
إنهم يخبروا الجهات المسؤولةTherefore, the
isolation and identification of this organism لما
بدهم يهزلوا أو يتعرفوا علي الشريشة كولاي O157
المسؤولة عن هذه المهمة هم ناس بيكونوا trained
personal ناس مدربين كيف أنهم يتعاملوا مع العينات
اللي فيها ال pathogenic الشريشة كولاي in
appropriately equippedلابوراتيوية برضه بتكون
المختبرات مجهزة بالأدوات والمعدات اللازمة وتحت
إشراف من الـqualified microbiologist اليوم
بدي يصير detection الإشريش الكولاي O157H7 في الـ
food the method has been shown to produce
satisfactory results with artificially
contaminated meats ممكن يكونإنه بنعزل ال bacteria
مناللحوم سواء كانت البيف اللحم البقري الفيل اللي
هي اللحم العجل و ال bark لحم الخنزير ممكن كمان
تكون موجودة في ال vegetables في ال dairy product
في ال spices التوابل و ال environmental samples
this method can be used successfully for the
detection of Escherichia coli O157 in other foods
برضه في ال food ingredients في مكونات الطعام
بالإضافة ل environmental samples الشغل بدي يكون
كالتالةابتجيلي العينة هي بتكون يعني ال sample unit
بدي أخد منها ال analytical unit باخد 25 جرام أو 25
مل حسب الحالة الفيزيائية لل sample تمام بروح أحطها
في 225 مل من media broth اسمها ال triptych soy
broth TSPهي ميديا وسط غدائي في أوساط تانية ممكن
استخدمها؟ اه في هنتعرف عليها لقدام هيك صار عندى
التخفيف واحد لعشرة كيف صار خمسة وعشرين جرام او مل
من العينة بحط عليها متين وخمسة وعشرين مل من
لتريبتك سوي البروث شو هال تريبتك سوي البروث؟ هي
pre enrichment mediaيعني ميديا بتثري نمو
البكتيريا، بتحسر الظروف اللي موجودة فيها البكتيريا
بدون أن تأثر على العدد، العدد ما بيزيد في الميديا
هاي إن أنا فقط أعملها resuscitation، يعني أنا
بتعملها انعاش، يعني أول خطوةاسمها الـ Primary
Enrichment إيش هي ال Primary Enrichment؟ يعني بقى
حط العينة بتاعتى في ميديا بتثرمه البكتيريا بتحسن
من الظروف الموجودة فيها بتعملها إنعاش لكن ما بتزود
العدد طيبمشان أخلي أنه البكتيريا يصيرها إنعاش
وتترى من نمو البكتيريا بروح أسمحلها بفترة 24 hour
incubator ع درجة حارة 42 سيليزياس هاي الخطبة
الأولى سمناها ال primary enrichment بعد هيك شو
بعمل؟ بعمل selective culture agar حكيت كلمة agar
معناته بدي أزرع على طبقبروح أاخد 100 مايكرون من
الـ Primary enrichment بروح أاخد من الـ Tryptic
soy broth اللي فيها البكتيريا بعد فترة الـ
Incubation طبعا خلصت الـ 24 ساعة بروح باخد 100
مايكرون بروح أزرع على الطبق قولنا هنستخدم ميديا
أسمك لإن هي بتميز الأشريشة كلها يعني الأشريشة كلها
O157 at 7 هيطلع لون البكتيريا لون colorless إذا
كانت O157 at 7هل هيك بكون متأكدة 100% إن اللون الـ
colorless بناته إشريت شكلية O147R7؟ الجواب لأ لازم
أعمل بعد هيك خطوة ال biochemical test وبعد هيك
بعمل ال confirmatory test ال biochemical test هي
فحوصات تعريفيةإنه بعمل زي مثلا ال Invic فالإجريش
يكون Y015787 هتكون positive positive negative
negative نيجي على ال confirmatory test اللي هي ال
serology test antigen antibody reaction مثال عليها
زي ما بتعرفوا اللي هي latex agglutination test
فكرة ال latex هيكون عندى فيها card ال card فيها
دوائرليها دي الدوائر بحط عليها الـ Antigen و الـ
Antibody و بعدين بعملهم mix و بشوف هل صار
agglutination أو لأ أنا عينتي بدي أكشف فيها هل
موجود إشريشيا كولاي أو لأ معناته الإشريشيا كولاي
تعتبر Antigen فالشركات المصنعة بتكون إمصان عالي
two vials علبتين بيشبهوا زي تحت القطرة هيكون vial
اسمها O157 Antisera يعني Antibody للأنتجن اللي
اسمه O157 الـ Vial التاني اسمه H7 Antisera يعني
Antibody موجه للـ H7 شو بعمل؟ بروح باخد ال drop من
الـ O157 Antisera بحطه على دائرة من الدوائر بروح
باخد ال drop من الـ H7 Antisera بروح بحطه على
دائرة تانية منفصلة طبعابعد هيك لو كانت عندي
البكتيريا على شكل كولونيه بروح أخد مسحة من
البكتيريا بحطها على أول دائرة بروح باخد مسحة تاني
من البكتيريا و بحطها على الدائرة التانية بعملهم
mix و بشوف هل صار agglutination أو لا مشان أحكي
هاي فعلا إشري شكولاي O157A7 لازم يصير
agglutination في الدائرتين معنى ال agglutination
أنهالعين اللي عندي فعلا بتمتلك أنتجين اسمه O157
وبتمتلك أنتجين اسمه H7 لهيك صار agglutination في
الدائرتين طيب لو
كان في عندي فقط agglutination في الـ O157 antisera
معناته البكتيريا اللي عندي هي عندها O157 عندها
O157Antigen لكن ما عندها H7 معناته هي الشريشة
الكولاي O157 not H7 طيب لو ما طلع agglutination
خالص معناته البكتيريا هذه مش O157 H7 طيب
لاحظوا أنا حكيت من ضمن الخطوات أول خطوة اللي هي ال
primary enrichment هل معنى الكلام في secondary
enrichment الجوابهلا في secondary enrichment طيب
ليش ما سردناها من ضمن ال steps لإنه مش كل العينات
بحاجة إنه نعمللها secondary enrichment طيب شو هي
فكرة ال secondary enrichment بعد ما أخلص ال
primary و بعملها incubation لمدة 24 ساعة على درجة
حرارة 42 بروح باخد واحد مل من ال flask هادبروح أحط
في تيوب في تسعة مل من ال media هيك صارت تخفيف عندي
عشرة أقل سالب اتنين ليش عشرة أقل سالب واحد لأ
لتيوب بالإضافة أنا ماخدة من flask تخفيفه عشرة أقل
سالب واحدطيب هيك صرت عاملة ال secondary enrichment
بعمله incubation و بعد هيك بروح أكمل الخطوات عادي
بروح أعمل selective culture agar بروح بعمل بعد هيك
ال biochemical test و ال confirmatory test طيب متى
بقلجأ لاستخدام ال secondary enrichment؟ لما أكون
بدي أعزل الشريشة coli O157من بعض أنواع ال foods زي
ال spices، التوابل، ال onion، البصل و ال garlic،
الثوم ال food had فيها antimicrobial effect يعني
عندها القدرة أنها تأثر على عدد الشريشة coli O157
اللي في العينات هايفاحنا حكينا ما بدنا العدد يتأثر
لهيك بحاجة إنه أعمل secondary enrichment لإن فكرة
الـonion و الـspices و الـgarlic نفس فكرة
الـantibiotic تقضي أو ممكن تقلل من عدد البكتيريا
فبدي أحافظ على العدد زي ما هو بروح بعمل secondary
enrichment اللي هي قولت بروح باخد من الفلاسك واحد
مل بروح أحطه على تيوب في تسعة مل من الميدياتمام،
هذا الاشي بيعمل أنه بيغذي الاشريشة Clio O157-H7
طيب أول حاجة ليش بعمل secondary enrichment to
reduce antimicrobial effect لحتى أقلل من ال
antimicrobial effect لبعض العينات كمان شغلة تانية
بحتاج أعملها secondary enrichment لما يكون في
microbial load في العينة يعنيالعينة فيها عدد
بكتيريا كتير غير الاشياريش الكولاي O157-H7 معناته
هيك هيصير في منافسة على الـ nutrient فممكن هي هي
البكتيريات الأخرى تستولي على ال nutrient أو
المغاديات اللي في ال media فابحاجة أنهيكون في
العينة أن يكون فيها وسط، هذا الوسط فقط بنمّل
إشريشة كولي O157H7 وبيعمل inhibition أو بيثبت نمو
باقي أنواع البكتيريات لهيك بنعمل secondary
enrichment to reduce microbial load لحتى أقل من
عدد البكتيريا اللي هي بتكون other than إشريشة كولي
O157H7الـ Principle نفس الخطوات اللي قلناهم إنه
أول إشي هيكون فيه selective enrichment بعد هيك راح
أعمل isolation from enrichment culture راح أنميها
على selective culture أجار بعد خطوة ال primary
enrichment و بعد هيك بدي أعزلها باستخدام الـ
monomagnetic separation اللي هو بدي أكون في مجال
مغناطيسي هذا طبعا هنتعرف عليها لقدامو بعدين
subculture to selective agar the selective agar
cultures are examined for characteristic colorless
بعد ما أزرع على selective culture agar بروح أطلع
على ال show على اللون اللي بيكون colorlessطيب، هل
هيك بأقول متأكدة أن هاي إشريش يقولي O157A7؟ قولنا
لأ، شو بعمل؟ confirmation of pre-sumptive لسه هاي
pre-sumptive بفترض لك أنا مش متأكدة أنها O157A7
كيف بيصير ال confirmation من خلال ال biochemical
والstereological test أنا قولت بالبداية في خطوة ال
primary enrichment أنه باخد 25 جرام أو مل منالعينة
بقى حطها 225 تريبتيك سوي بروث أو أنواع تانى من ال
media هنتعرف عليها لقدام فهد هو ال media اللى
هتلزمها Modified tryptic soy broth لتريبتيك سوي
بروث هي media general صارت ساقلها modification
حطوا فيها النوفو بيوسين النوفو بيوسين هو
antibiotic شو بيعمل؟ بيعمل inhibition لجرام
positive بكتيريالهيك سموها Modified Tryptic Soy
Broth في كمان Interior Hemorrhagic Atrial Coli
Enrichment Broth EEP طبعا Interior Hemorrhagic
Atrial Coli ده هو اسم تاني لـ Atrial Coli O157H7
Modified Hemorrhagic Coli Agar with Telluride and
Cephalidin إيش هو Telluride؟ هاد selective agent
Cephalidin هو antibioticmodified sorbitol ماكنكي
أجار اللي هي الأسماك طبعا هاي أجار بتلزمني في حالة
ال selective culture أجار فالخطوة التانية modified
ليش؟ لأنه شيلنا منها ال lactose و حطينا بدله ال
sorbitol ال media هاي فيها till you write ك
selective agentCefexime، Antibiotic، Cefsulidine
برضه كمان Antibiotic الـ cell bios شو هو؟ هو الـ
di-saccharide بنتج من الهيدروليس لسيريلوز كمان
بنحتاج لكشغل في البحث عن إشريتش like O157H7 بحتاج
إلى نصف المية بوتاسيوم صلفات لشو بحتاجه needed for
some spices and foods containing large amount of
spices بحتاج في حالة لو .. لو كان عندي spices أو
لو كان في مثلا
لو كانت عينة لحمة و فيها كمية كبيرة من ال spices
شو بتعمل هاي؟البوتاسيوم سالفات بأستخدمه لحتى أقلل
من الـ antimicrobial effect أنا قولت إنه ال spices
بالإضافة إنه أنا بأعمل secondary enrichment برضه
بأضيف نصف المية بوتاسيوم سالفات فلو سألتكم سؤال
بالامتحان مثلا لو عندك لحمةواللحمة طبعا كان فيها
spices شو هي الخطوات بأعملها from A to Z من
البداية بمجرد ما تصلني طبعا هذه عينة solid بالنسبة
لل sample unit بدي أخد من أكتر من مكانبعد هيك
بعملها لـ Treatment و لـ Preparation الصح و لو بدي
أبحث فيها مثلا في السوقة اللي كانت نوعية اللحمة
بدي أبحث فيها على إشريش أكولي O157-H7 بدي أضيفه
إنه إحنا بنعمل الخطوات
كلهيتهم و بدي أضيف إنه بدي أحط عليها بوتاسيوم
صلفية to reduce antimicrobial effect كمان بنحتاج
للـHCl و لـNa وH هدول إتنين بيضبطوا الـBH للـfood
قلنا لازم ال food يكون متعادل لإن لو كان acidic or
basic هيأثر على ال pH indicator بتاع ال media ال
pH meter بيقيص ال pH سومكر البلندر أو أي إشي من
هذه القبيل بيستخدم إنه بيخلي العينة homogeneous
بيحولها من solid إلى liquid control culture اللي
هي ال ATCC قلنا high American type culture
collectionاللي هي بتكون بكتيريا معرفة عالمياً
بنحتاج كـ Positive Control هي شريشة كولاي O157H7
Negative Control شريشة كولاي مش O157H7 بنحتاج كمان
لـ Incubator و لميديات لـ Tryptic Soy Agar With
Yeast Extract هذه كان ممكن نحتاجهم Rapid
Identification Kit زي اللي هي الـ API Analytical
Profile Indexالـ Lytic Agglutination Kits هي أنتجن
أنتبادي الـ MVC هي Biochemical Test يوريا
أجارسلاند ممكن أحتاج إلى اليوريا فلو كانت
البكتيريا عندها أنزيم اليورياس هتكسر اليوريا اللي
في الميديا و هتحطيني أمونيا الأمونيا بترفع ال pH
هيصير اللون الوسط بدل ما هو أصفر بتحول إلى اللون
pink ممكن أنكم تشوفوه يعني فوشي فوشي يعني يعني على
الآخر بيكون واضحالـMUG هد هو الـreagent لو كان
البكتيريا عندها الـglucorindiase هتتغير اللون،
هيصير fluorescent لكن الشريشة Chloe O157H7 ما
عندها، الإنزيم هد وبالتالي مش هيصير fluorescent
ممكن كمان إنه نستخدم reagent تاني other than
الـMUG اللي هو الـbromochloroendrogluconide نحتاج
الـO157 وH7-antiseraمشان لما نشتغل الـ
confirmatory test اللي هو الـ latex agglutination