السلام عليكم ورحمة الله وبركاته طالبات العزيزات
اليوم إن شاء الله راح نشرح محاضرة بعنوان white
blood cell count. في نهاية هذه المحاضرة راح نكون
بنعرف كيف احنا بنعد خلايا الدم البيضاء بطريقة
manual، بطريقة يدوية، وكيف بنحصل على عدد خلايا الدم
البيضاء as a total، إذا white blood cell count
معناها عدد خلايا الدم البيضاء. في البداية خلينا نحكي
كتقديم بسيط عن الـ white blood cells و الـ
characteristics لها، خصائص هذه الخلايا. بيحكي لي
whenever a germ or infection enters the body, the
white blood cells have a variety of ways by which
they can attack. إذا كان في عندي germ، جراثيم أو
عدوى، مسبب لعدوى، أو حتى أجسام غريبة دخلت إلى جسم
الإنسان، تمام؟ فالـ white blood cells عندها variety
of ways، طرق متنوعة لتهاجم بها هذا الجسم الغريب
أو هذا الكائن الغريب اللي غزا جسم الإنسان أو دخل
إليه. Some will produce protective antibodies، بعض
هذه الخلايا، بعض أنواع من الـ white species ممكن
أنها تنتج antibodies، تمام؟ أجسام مضادة لحتى تحارب
فيها هذه الكائنات الغريبة أو الأجسام الغريبة that
will overpower the germ، تتغلب فيها من خلال الـ
antibodies، تتغلب على الكائنات الدقيقة أو
الميكروبات أو الأجسام الغريبة اللي غزت الجسم أو
دخلت إلى الجسم. Other will surround and devour the
bacteria. أنواع أخرى من هذه الخلايا ممكن أن تحيط
بالكائنات الدقيقة و تغزوها أو يعني تلتهمها أو
تقتلها، تمام؟ The white blood cells have a rather
short life cycle. بنظر إلى الـ RBCs، حكينا إنه فترة
حياتها 120 يوم، تمام. الـ white blood cells بالمقارنة
عندها short life cycle، حياتها أو فترة حياتها قصيرة
من few days إلى few weeks، من أيام قليلة إلى أسابيع
قليلة، تمام؟ إذا الـ RBC بتعيش مائة و عشرين يوم، الـ
white BC من few days إلى few weeks، البلاتلت بتعيش
عشر أيام تقريبًا. إذا كل خلية الها life span أو life
cycle، يعني فترة حياة هي بتعيش فيها. فالـ white
species بتعتبر فترة حياتها قصيرة، يعني لإنها
باستمرار بتقابل مثلاً خلايا متوفية، يعني dead cells،
أجسام غريبة، كائنات غريبة، بقايا، T-Shirt، يعني waste،
أحيانًا كل هاي الشغلات بتخلصنا منها داخل جسم
الإنسان، ف... لذلك هي فترة حياتها قصيرة، نوعًا ما.
Several different and diverse types of leukocytes
exist. احنا ذكرنا في محاضرة الـ blood components إنه
أنا في عندي أنواع من خلايا الدم البيضاء. حكينا إنه
في عندي خلايا بسميها محببة، تمام؟ granulocytes، ماذا
يعني محببة أو granulocytes؟ هي الخلايا اللي يوجد في
الـ cytoplasm تبعها حبيبات، تمام؟ هاي الحبيبات طبعًا
بيكون فيها إنزيمات هاضمة وإنزيمات قاتلة، والسلاح
تبعها هذا الـ store، مخزن السلاح لخلايا الدم المحببة،
تمام؟ في عندي خلايا غير محببة، تمام؟ وهاي الخلايا
غير المحببة اللي احنا بنسميها agranulocytes، و
حكينا إضافة الـ A في بداية الكلمة للنفي، تمام؟ A-
granulocytes يعني لا تحتوي على حبيبات، وحكينا إنها
هي الـ monocytes و الـ lymphocytes. هلأ رح نذكرهم و
نستعرضهم مع بعض مرة ثانية، ولكن خلينا بس نكمل.
بيحكي لي إنه هذه الخلايا، صح، أنا في عندي different
and diverse types of leukocytes، صح هي متنوعة و
عديدة، تمام؟ ولكن they are all، كلهم produced and
derived، تم إنتاجهم أو يعني مشتقين من multipotent
stem cells، من نفس الخلية الأم اللي بنسميها
hematopoietic stem cells، موجودة في الـ bone marrow. طيب نذكر
مع بعض أو نستعرض مع بعض هذه الصورة اللي بتوضح
خلايا الدم كلها بشكل كامل، وهي من وين جاية أو من
وين تم اشتقاقها. في عندي، احنا طبعًا احنا حكينا إنه
يتم تصنيع خلايا الدم في الـ bone marrow، في نخاع
العظم، بيكون في عندي hematopoietic stem cells. نجرب
نكبر الصورة. Hematopoietic Stem Cell اللي هي عبارة عن
multipotent stem cell، خلية جدعية ممكن تعطيني
عدد معين من الخلايا، يعني ممكن إنها تتميز إلى عدد
معين من الخلايا. فهي بصراحة لما بتنقسم تعطيني two
mother cells، خليتين أم، واحدة اسمها myeloid، myeloid
progenitor cells، myeloid، تمام؟ والخلية الأم
الثانية اسمها lymphoid. طيب الـ... الخلية الـ... الـ
myeloid، هاي لما بدها تنقسم وتتميز أيضًا في عندها
بعض خصائص التمايز، فهي بتنقسم وتتميز لمين؟ لـ
eosinophils، و basophils، و neutrophils، اللي هي الخلايا
الـ granulocytes، المحببة. ممكن تعطيني أيضًا monocytes،
وتعطيني erythrocytes اللي هي الـ RBCs، و platelets.
هدول كلهم مشتقين من نفس الخلية الأم اللي هي
الـ myeloid. طبعًا الـ lymphoid، إيش هتعطيني؟ الـ lymphoid
بتعطيني الـ T cells lymphocytes، و B cell lymphocytes،
و natural killer lymphocytes، و dendritic cells. يعني
في النهاية هي بتعطيني lymphocytes لحالها بأنواعها.
طبعًا lymphoid lymphocytes، myeloid بتعطيني الـ
granulocytes اللي هم ال eosinophils، basophils، و
neutrophils، بالإضافة لـ RBCs، و monocytes، و platelets.
طبعًا. طيب، بغض النظر، احنا اليوم عنوان محاضرتنا اللي
هو الـ white blood cell count، يعني أنا معنية في مين؟
معنية في الـ granulocytes اللي هم ال eosinophils، و
basophils، و neutrophils، ومعنية في الـ agranulocytes
اللي هي monocytes و lymphocytes، تمام؟ طيب حكينا إن
هم مشتقين من مين؟ من خلية واحدة بالأصل اللي هي الـ
hematopoietic stem cells، حكينا بنسميها multi-
potent stem cells. إيش يعني multipotent؟ يعني
خلايا... خلية جدعية يمكنها أن تتميز وتعطيني عدد
معين من الخلايا، تمام؟
Leukocytes are found throughout the body، موجودة في
جسم الإنسان، موجودة في الـ blood، في الـ lymphatic
system، في... موجودة أحيانًا في الـ tissues، يعني في
في الكبد، خلايا lymph... white species خاصة فيه،
يعني to haggle، أي كائن ممكن يخترق الكبد، في في الـ
spleen، في في الـ intestine، يعني وين الأعضاء اللي
موجودة، ممكن أن تتعرض إلى infection، موجود فيها خلايا
متمركزة من الـ leukocytes، بالإضافة إلى إنه أيضًا كمان
الـ leukocytes، الـ white blood cells، يعني ممكن تكون
بتوجد في الـ circulation، في الدم، في مسار الدم، في
الدورة الدموية، وأيضًا في الـ lymphatic system،
بالجهاز الليمفاوي. The name white blood cells، من وين
جا؟ ليش سميناها احنا white blood cells؟ هل فعلاً هي
اسمها أو لونها أبيض لحتى سميناها white؟ بيحكي لي
فعليًا تم اشتقاق الاسم هذا لأنه from the fact that
after centrifugation of a blood sample, the white
blood cells are found in the buffy coat. تم اشتقاق
اسم الـ white blood cells لإنه لما احنا بنعمل
centrifugation، نفس عينة الدم على الـ centrifuge، الـ
white blood cells بتكون موجودة في طبقة الـ buffy
coat اللي هي أصلًا لونها أبيض. فعليًا الـ white blood
cells هي خلايا colorless، مش ملونة، تمام؟ ولكن نظرًا
لأنه هي موجودة في منطقة الـ buffy coat اللي بتأخذ
اللون الأبيض، تمام؟ فبنسميها احنا white blood cells، و
... احنا هذا... هنا بيشرح لي إنه لما احنا بنفصل عينة
الدم على الـ centrifuge، بيكون في عندي الـ buffy coat،
اللي هو عبارة عن thin layer of the nucleated cells،
تمام؟ موجود between the sedimented red blood cells
وبين البلازما، موجود بين الـ RBCs و البلازما، وهذا
ممكن يجيني تعريف في الأسئلة، ماذا... يعني إنه لما
أجي أحكيلك the thin layer of the nucleated cells
that is found between the RBCs layer and the plasma
layer، اللي بتحكي لي هي الـ buffy coat، وممكن أسألك
ماذا يحتوي الـ buffy coat؟ اللي بتحكي لي يحتوي على
white blood cells و platelets، طبعًا. طيب الـ... الـ white BCs
لها اسم ثاني اللي هي leukocytes. ماذا تعني
leukocytes؟ Leukocytes هي كلمة يونانية، تمام؟ و
معناها الـ white cells. Leuko white، معناها، و cyte
يعني cells. زي فكرة الـ RBCs، بنسميها erythrocytes، و
أيضًا هي كلمة يونانية، erythro معناها red، و الـ
cyte معناها cell، تمام؟ طيب مبدأ عد خلايا الدم
البيضاء، كيف احنا بنعد خلايا الدم البيضاء؟ في
البداية في عندي free-flowing capillary، أو ممكن
استخدم well-mixed anticoagulated venous blood.
بستخدم، يعني بأخذ حجم معين من الدم، ويكون في عندي
محلول EDTA، أنا بخلطه مع هذا الدم بحيث
إنه هذا المحلول يخلصني من الـ RBCs ويحفظ لي الـ WBCs
عشان أنا أتمكن من عدها. باستخدام شريحة معينة مخصصة
للعد، أنا بحط السائل أو المحلول اللي أنا حضرته، اللي
هو عبارة عن الدم المخفف، بحطه على هذه الشريحة،
وببدأ أعد على الـ microscope، تمام؟ هذه هي الفكرة
ببساطة. خلينا نتعمق فيها أكثر ونشوف إيش تفاصيلها
العلمية. Free-flowing capillary or well-mixed
anticoagulated venous blood is added to a specific
volume of the diluent in the micropipette. طبعًا احنا
ممكن أنا أستخدم عينة من الوريد، تمام؟ وأحطها في
tube، أنبوبة يعني عليها anticoagulant، تمام؟ وتصير هذه
العينة اسمها well-mixed anticoagulated venous
blood.
في tube، أنبوبة، لإنه احنا لما بنسحب عينة دم في الـ
أنبوبة، أنا بحكي لكم اعملوا good mixing، تمام؟ بنعمل
good mixing، وبعد هيك طبعًا أنا حكينا إنه هذا الـ
blood ممكن أنا أستخدمه عشان أعمله dilution مع
diluent. طيب في نوع آخر أو مصدر آخر للعينة تبعتي
ممكن يكون هو عبارة عن free-flowing capillary، يعني
من الـ skin puncture، تمام؟ من الـ... من الإصبع، و
مباشرة أعبي capillary. طب الـ capillary هذه إيش
خصائصها؟ الخصائص... اسمها؟ هي Thoma pipette. خلينا
نستعرض مع بعض صورة لهاي الـ pipette اللي هو الـ... الـ
... الـ capillary اللي احنا بنستخدمها ونشوف إيش هي
خصائصها. هي مش capillary بمعنى capillary زي الـ
capillary tubes اللي أنتم شفتوهم، لكن هي من الداخل
تمام، مصممة على إنه المحلول يتم تعبئته فيها
بالخاصية الشعرية، يعني هي من الداخل رفيعة كثير ولو
إنها ممكن تكون سميكة من برا، تمام؟ لكن من جوا رفيعة
كثير، تمام؟ في عندي طبعًا واحدة بتكون مخصصة لعد الـ
RBCs، وواحدة مخصصة لعد الـ white blood cells. احنا اليوم راح
نذكر اللي احنا بصدد نتعرف عليها اللي هي الـ white
blood cells. Thoma pipette. لما نشرح الـ RBCs count راح نتطرق لـ
الـ RBCs pipette. طيب
reagents اللي ممكن أنا أستخدمها؟ طبعا إحنا حكينا
أن أنا لازم عينة الدم أخففها، بدي أستخدم diluting
fluid، طبعا الـ diluting fluid هذا في عندي أنواع منه
ممكن استخدم ascetic acid بتركيز 2% volume to
volume، وطبعا إحنا أخذنا محاضرة الـ dilution وشرحنا
كيف أنا بحضر تركيز volume to volume 2% مثلا أو 3%
حسب، وهذا ممكن تسأله عنه فبتراجعوا لمحاضرة الـ
dilution وبتعرفوا كيف إحنا بنحضر volume to volume
wet to wet أو wet to volume، تمام؟ طيب، diluting
fluid ممكن يكون Acetic acid 2% volume to volume أو
HCl 1% volume to volume أو حتى ممكن يكون عندي نوع
ثالث اللي هو الأكثر شيوعا واستخداما هو الـ Terg
solution وهو المحلول اللي إحنا راح نستخدمه، تمام؟
في المختبر، مكون من glacial acetic
acid، تمام؟ وcrystal violet صبغة اسمها crystal
violet، وdistilled water، هلأ الـ glacial acetic
acid حمض، تمام، وظيفته أنه يكسر لي الخلايا بمساعدة
أيضا الصبغة كمان بتساعد على أنها تخرب الـ membrane
للخلايا، فبسهولة تكسرهالـ... لـ crystal violet راح
تصبغ لي أنوية... بما أنها صبغة راح تصبغ أنوية الـ
white pieces، فإذن أنا بإمكاني أن أشوف الخلايا
... تمام ... أنويتها من الداخل أو الخلايا من الداخل
مخدة اللون الأزرق اللي هو نوع اللون لـ crystal
violet، فإذن بإمكاني يعني أعدها بسهولة ب... من خلال
أن أعرف أنها هي مخدة اللون، تمام؟ طيب، الأدوات
اللي بدي إياها، محتاجة diluting fluid وحكينا راح
نستخدم في المختبر Terg ومحتاجة Thoma white pipet
اللي هي المدرجة من نصف لواحد لحد أحد عشر، حكينا الـ RBC's
النوع بتاعي بتكون مدرجة من نصف، واحد، مية، واحد، والـ bulb
تبعها كبير، أكبر من الـ white pieces زي ما أنتم
شايفين، كنتوا في الصورة هنا، الـ... الـ... الـ white
pieces، ال... الحجم تبعها أكبر، تمام؟ فهي عشان هيك
نهاية التدريج تبعها لـ 101 و... لإن عددها أكبر بكون
محتاجة أنها تتخفف أكثر، عشان هيك ال... ال... التدريج
أكبر هنا، التفاصيل هاي رح ناخدها في الـ RBCs count
lecture، ولكن إحنا حاليا رح نحكي فقط عن الـ
thermopipet اللي هي خاصة بعد الـ white pieces، حكينا
تدريجها نصف، وواحد، ولحد 11، تمام، محتاجة هذه الـ
thermopipet، محتاجة الـ hematocytometer chamber اللي
هي الشريحة المخصصة للعد، محتاجة cover slip اللي هي
القطعة الزجاجية اللي أنا بحطها على الشريحة علشان
تغطي لي العينة، وبإمكاني بعد هيك أن أستخدم... يعني
أحطها على الـ microscope وأعد، بلزمني microscope،
بلزمني wipe شاش أو جوز أو قطن، بلزمني برضه كمان
قطع أو... قطن مغموسة بالكحول اللي هي alcohol pads
تمام، إذن إيش الأدوات اللي بتلزمني؟ حكينا
Thoma pipet، بيكون في عندي أيضا متصلة بـ rubber، هذا
الـ rubber بيكون يا بنات معقم ونظيف، ومتصل بقطعة
عشان إحنا أحيانا بنستخدم الفم في سحب المحلول، وأيضا
في عندي هنا hematocytometer chamber اللي هو عبارة
عن شريحة مخصصة للعد، شايفين أنه مش زي الشرائح
العادية، الزجاجية العادية البسيطة، هي شريحة مصممة
بطريقة معينة تمكنني من عد الخلايا وحساب العدد
بطريقة accurate، تمام؟ فإذن هذه هي الأدوات اللي
بتلزمني، طبعا اللي هي hematocytometer، الـ chamber بيكون
موجود في plastic container خاص فيه، عشان إحنا نحافظ
عليه ما ينكسر، لإنه بنرجع بنستخدمه، مش زي الشريحة
العادية، استخدمته، حطيت عليه مسحة دم مثلا، بعد ما
أخلص بكبها، لأ، في عندي هذا، يعني أنا بعقمه وبرجع
بستخدمه لأكثر من عينة، لإنه يعني هو غالي الثمن و
ما بنفع إحنا نتلفه، ولازم نحافظ عليه، فإذن هو
بيكون موجود في plastic container، الـ
hematocytometer، تفاصيل أكثر عن هذا الـ chamber، الـ
hematocytometer counting chamber is used for cell
counting، هو عبارة عن... إحنا بنسميه hematocytometer
chamber... chamber، ولكن هو عبارة عن شريحة مخصصة
لعد الخلايا مثل ما ذكرنا، it's constructed so that
the distance between the bottom of the cover slip
and the surface of the counting area is point one
millimeter، هو عبارة عن مصمم بطريقة معينة بحيث أن لو
حطيت عليه cover slip اللي هو الغطاء الزجاجي اللي
أنا بحط عليه، تمام، المسافة حتكون ما بين الـ cover
slip والـ chamber حتكون مسافة point واحد
millimeter، تمام؟ اللي هي يعني ال... ال... المنطقة
أو المسافة اللي أنا بعبي فيها العينة، ارتفاع العينة
حيكون point واحد millimeter، لإنها حتكون موجودة في
ال... المنطقة ما بين الـ chamber والـ cover slip، the
surface of that chamber contains two square ruled
areas separated by a H shape، خليني أشوف، زي ما
أنتم شايفين، هذا هو الـ chamber، تمام؟ زي عامل شكل
الـ H، وإحنا بنعد؟ في عندي هنا مربع وهنا مربع
وبيكونوا مسطرين ب... تسطيرة معينة، حورجيها لكم
بالعين المجردة، أول ما نرجع على المختبر، على شان
أساس أنكم تشوفوها منيح، طبعا لو أنا جيت حطيت cover
slip، قطعة زجاجية cover على هذا الـ chamber، طبعا أنا
بحط الـ cover slip بعدين بعبي العينة، طيب، فإذن لو أنا
حطيت الـ cover slip راح يكون في عندي مسافة فاصلة
هنا بين ال... بين الـ chamber والـ cover slip، هذه
المسافة الفاصلة، ارتفاعها واحد من عشرة millimeter
هنا بتكون العينة، أو يعني هنا أنا ب... ب... بعمل
تعبيّة على العينة، بعبي العينة في هذه المنطقة، طبعا
لازم أنا لما أعبي العينة، تكون العينة فقط على
المربع، يعني حوافها جاية على حواف المربع بالضبط،
ما بنفع أن العينة تكون خارج عن حواف المربع، زي هذا
الشكل، أو حتى فيها air bubble، فيها فقاعات، يعني
فراغات، لإن هذا هيأثر على الحسابات، طبعا، فهيكون في
عندي خطأ، error، إذن لازم أنا أعبيها بشكل أن ما يكون
فيه فراغات، إنها ما تطفح على الجوانب، لازم تكون فقط
على حواف المربع اللي مخصص للعد، هذا المربع وهذا
تمام، وتكون يعني حجمها مناسب وكميتها مناسبة، تمام،
وما تكون طبعا يعني إنها هيك عاملة زي التفاف، دائرة،
أنه يعني الحجم ناقص، لأ، لازم تكون well-fit، يعني
تماماً، مخدة شكل المربع اللي هي جالسة فيه، هنا...
هذا شكل إيه؟ أو يعني التعليمات اللي خاصة بالتعبئة،
طبعا إحنا بنعد... ممكن نعد في مربع واحد في واحد
منهم، وممكن أعد في المربعين، وفي نهاية القراءة
أقسمها على اثنين، آخذ الـ average لها، أقسمها على
اثنين، تمام؟ طيب،
إيش ال... التجربة طبعاً؟ أول حاجة، سواء كان أنا
بستخدم معي الـ blood من skin puncture، يعني من
الإصبع، أو من EDTA tube، يعني سحبت... سحبت من وريد
ووضعتها في ال... في EDTA tube، عملت mixing منيح
مع الـ EDTA، سواء كانت العينة skin puncture أو vein
puncture، أنا لازم أملأ ال... ال... ال... ال... الـ
... ال... ال... ال... ال... ال... ال... ال... ال...
ال... ال... ال... ال... ال... ال... ال... ال... الـ
... ال... ال... ال... ال... ال... ال... ال... ال...
ال... ال... ال... ال... ال... ال... ال... ال... الـ
... ال... ال... ال... ال... ال... ال... ال... ال...
ال... ال... ال... ال... ال... ال... ال... ال... الـ
... ال... ال... ال... ال... ال... ال... ال... ال...
ال... ال... ال... الـ capillary أو الـ Thoma pipet
بالـ blood، طبعا، إذا أنا حطيتها في tube، حتتبهدل من
برا، فلازم أنا أمسحها بـ wipe، تمام، عشان أنظفها، أشيل
الـ excess من الـ blood اللي موجودة على السطح، أو
عليها من برا، تمام، لإن هذا هيأثر على الـ dilution،
تمام؟ إذن، أول حاجة، أملأ إيه؟ ال... ال... الـ Thoma
pipet لعند علامة النصف بالـ blood، بعدين امسحي، wipe
the outside of the capillary، بنمسح الـ capillary
من برا، علشان الـ excess blood اللي موجودة عليها من
برا، ممكن يأثر على الـ dilution، تمام؟ ليش؟ لإن أنا
هاي الـ capillary، بعد ما أملأها بالـ blood، بدي أحطها
بشكل عمودي في tube، وهذا الـ tube موجود فيه diluent،
تمام؟ و... و أسحب بالـ diluent، لأ، ال... الـ
capillary بالـ diluent لعند العلامة 11، تمام؟ لعند
العلامة 11، طيب، إيش اللي راح يصير بالضبط؟ خلينا نرجع
لشكل الكابيلاري عشان نشرح عليها، أنا مملأتها لعند
العلامة هنا نصف، blood، مسحتها ونظفتها من برا، عشان
الـ excess blood ممكن يؤثر على الـ dilution، بعد هيك
بأخذ الكابيلاري هادي بشكل عمودي، بفوت في محلول، تمام،
المحلول هذا عبارة عن diluent، تمام، it's a solution،
حكينا ال... رح أسحب، أو يعني رح أ... ال... ال...
أكمل في... تعبئة التوما بايبِت، بدي أوصل لعند
العلامة 11، تمام؟ طيب، إيش اللي راح يصير؟ الـ blood
هنا لما يجي يعبى التارك، الـ blood هيطلع... كله
حيستقر وين؟ هيستقر في منطقة المستودع، يعني هنا الـ
blood حيكون موجود، تمام؟ وهنا حيصير فقط موجود
تارك، وهنا موجود أيضا بقايا الـ blood مع ال...
التارك، طيب، بعد ما أملأ لحد العلامة 11، بجيب قطنة و
بفضي محتويات الـ stem هنا، اللي هي إيش صارت موجود
فيها؟ موجود فيها فقط تارك، تمام؟ فقط موجود فيها
تارك solution اللي هو الـ diluent، لإن الدم خلاص
صعد إلى منطقة المستودع، طيب، إذن بعد ما أملأ الـ capillary
لحد العلامة 11، طبعا لازم أسكرها هيك بعد ما أطلعها
من الـ diluent، بسكرها بالسبابة، لإن أي فتحة فيها
ممكن يرجع يكب المحلول منها، طبعا لازم أعملها مغلقة،
وبعد هيك بروح على قطنة، على قطعة قطن، بفضي محتويات
الـ stem هي الواحدة هذه، طبعا يعني بفضي تقريبا ثلاث
قطرات أو أربع قطرات، اللي هم محتويات الـ stem، وبعد
هيك بروح بمسح الـ... الـ hematocytometer وبنظفه
بالكحول، بعد بقطعة قطنية أو قمع... يعني جوز شاش
مبلل بالكحول، بنظفه، بحط عليه cover slip و
باستخدام الـ pipette من عن الطرف هنا، من عند حواف، أو
حافة الـ cover slip، بسير أفرغ محلول بحيث أنه يملأ
المربع ويعبيه بشكل حكينا متناسق، أنه ما يطفح من عن
الجوانب، ما يكون excess فيه عندي، وما يكون
المضغوط بهذا الشكل، و في المربع الرابع لما يكون
بهذا الشكل تمام؟ فإذا أنتِ when كدك تعرفي حالكِ في
أي مربع، مثلاً كنتِ هنا في أي مربع في .. مثلاً كنتِ هنا
و شفتِ إنه مضغوط على الجانب من هنا و من .. من تحت
فمعناها بدكِ تتخيلي الرسمة كلها، و تعرفي حالكِ إنكِ أنتِ
في المربع الثاني لو مثلاً، لإنه طبعاً هو ما بعرض لك كل
الرسمة، هذه الـ field، الـ field بيكون مركز على الـ 16
مربع اللي هنا تمام؟ و جايب لك .. بس عرض لك جزء من
المضغوط اللي محيط في الـ 16 مربع اللي أنتِ بتقرئي
فيهم تمام؟ ف .. وين اتجاه المضغوط، بتتخيلي أنتِ في
مخيلتكِ كيف الرسمة أو الشكل بشكل مكبر، و بتعرفي حالكِ
أنتِ وين بالظبط، ف .. و بتعرفي حالكِ من وين .. وين
بدكِ تتنقلي، يعني أنتِ مثلاً في المربع الأول شفتِ
المضغوط هنا و هنا، معناها أنتِ في المربع الأول، وين
بدكِ تنتقلي؟ بدكِ تنتقلي للثاني، فمعناها مثلاً بدكِ
تتحركي بهذا الاتجاه في الـ field طبعاً، أو بدكِ تنزلي
هيك عشان تروحي على الثالث، فإذا بيساعدكِ وين ..
تحددي وين أنتِ موجودة، و كيف بدكِ تنتقلي لأي مربع، و
كيف الاتجاه تبع حركتكِ تمام؟ هذه التفاصيل كلها راح
نشتغلها خطوة بخطوة مع بعض، فيعني إذا في شيء مبهم، أو
شيء تساؤلات، كيف احنا بنعمل هاي الشغلة، حاولوا أن
يعني تكونوا relaxed، و ما .. يعني ما تستغربوا، أو
تخافوا، لإنه الشيء راح يكون على التطبيق إن شاء الله
ما بحكيش إن هو هيكون سهل جداً، ممكن يكون في صعوبة
ولكن يمكن تجاوزها، و راح تتعلموا، و تكون إن شاء الله
متمكنين، و شاطرين، طيب احنا بس في النهاية بدي أذكر
أنّي أنا لما بتحرك بهذا الاتجاه، يعني أنا بتحرك
لليسار في الشريحة، بكون بتحرك لليمين على الـ chamber
لإنّ الحركة بتكون معاكسة، و مقلوبة، أيضاً الصورة
بتكون معاكسة، و مقلوبة تمام، طيب إيش اللي أنا بدي
أعدّه في الـ 16 مربع هدول؟ بدي أعد النقاط السوداء هاي
طب كيف أنا أعرف هذه النقطة السوداء؟ خلية، أو دبرس، و
غبار، أو مثلاً أشياء موسّخة، الشريحة ممكن تكون يعني
شيء مش خلايا، كيف أنا بدي أعرفه؟ ذاكرين تركيب الـ
microscope، لما حكينا إنّ الـ course adjustment عشان
أجيب الـ field، عشان أقرب المسافة ما بين الـ stage و
العدسات، و الـ fine adjustment علشان أشوف التفاصيل
التفاصيل تمام، فأنا بلعب بالـ fine adjustment إذا
ظهرت لي في داخل الخلية، هذه في داخل النقطة السوداء
لون أزرق تمام، أو حتى أخضر، يعني هو ممكن يكون على
أخضرار، لأ بسبب إضاءة الـ microscope، بس هو فعلياً
الصبغة لونها أزرق تمام، فإذا ظهر عندي لون في الداخل
معناه عادي، خليها ما أخذة لون، مصبوغة بالصبغة اللي
موجودة في مكونات الـ Turk solution، في مكونات الـ
dilutant اللي أنا استخدمتها، طيب الحساب، أو الحسابات
اللي احنا بدنا نجريها، لحتى نجيب التراكيز، أو العدد
الخلايا، الـ white pieces count، الـ total white
pieces count، طبعاً أنا عندي عمق العينة، طبعتي اللي
هي المسافة اللي أنا عملت فيها، أو ملأت فيها العينة
كانت 1 من 10 ملي متر، اللي هي المسافة الفاصلة ما
بين الـ chamber و cover slip تمام؟ طيب الـ .. الـ
dilution اللي أنا بستخدمه، أنا بعمل dilution واحد
لعشرين، من أين أجا .. من أين أتى هذا الواحد لعشرين؟
خلينا نرجع للـ Thaumabiotic و نستذكر مع بعض احنا إيش
ذكرنا بخصوص الـ Tom and pie، أنا ملأت الدم لعند النص
تمام، و بعد هيك كملت بالـ daily one لعند 11، يعني
كمان في عندي، نرجع هنا نعمل
بنحط notes، كان في عندي blood، خدنا نكتب هنا بس الـ
blood إلى diluent تمام؟ كان في عندي الـ blood حطيت
أنا نص تمام؟ و الـ .. الـ diluent كان 11 تمام؟ طيب، في
عندي محتويات الـ stem، أنا حكيت، فضّيتها، اللي كانت
daily want لحاله، تمام؟ ذاكرين .. ذاكرين لما
حكيت لكم الـ blood بيطلع على المستودع، و الـ .. الـ stem
اللي هي من صفر لـ واحد من .. لعند الواحد، هذه بتصير
daily want كامل، أو daily want صافي، ترك لحاله تمام، و
أنا بفضّي محتويات هذا الـ stem على قطعة قطن، اللي هي
الثلاث أو أربع قطرات اللي أنا بتخلص منهم، فأصبح أنا
خلصت .. اتخلصت من محتويات الـ stem، اللي هي عبارة عن
واحد، يعني صار عندي الـ dilution نص إلى .. إلى
عشرة، اللي هي الواحد اللي خلصت منه
تمام؟ اتخلصت منه، الواحد، طب ليش أنا عملت أصلاً، عبيته
لعند الـ 11؟ لأ، لإني أنا معنية إنّه يعني بهذه الـ ..
الـ .. الكمية من الـ daily want، أنا بكون فوتت الدم
للمستودع، يعني أمنتّه موجود في المستودع تمام؟ طيب
فإذا، و بعد هيك بقايا الـ stem اللي هي فيها daily
one لحالي، اللي هي أصلاً كلها حجمها واحد، بتخلص منه
على قطعة قطن، فبيصير عندي في النهاية أنا أخذة نص لـ
11، في واحد اتخلصت منه، يعني نص لـ 10، يعني واحد تمام
إلى
عشرين تمام؟ الـ dilution طبيعي واحد إلى
عشرين، تمام، جديد بالذكر، أحكيلكم إنّ هذه الـ .. الـ
bead اللي هنا، بعد ما أنا أوصل الدم للمستودع، هذه الـ
bead، لو أنا عملت mixing، رجّيت الـ .. الـ by bit طبعاً
سَكَرْتها بـ .. بأصابعي، سَكَرْت فوها من هنا و من هنا، و
عملت mixing تمام، هذه الـ beads راح تتحرك، و هي تخلط
الدم مع الـ diluent، و راح تساعد على تكسير خلايا الـ
RBCs، و تنصبغ الـ white BCs بالصبغة اللي موجودة في
المحلول، علشان في النهاية أنا أحصل على محلول متجانس
أملؤه داخل الـ chamber، طيب أنا عدّيت في مربعات، المربع
كل واحد منه كان ستة .. يعني مقسّم إلى ستة عشر مربع
صغير، هنا المربعات هذه، أنا عدّيت أربعة مربعات، كل واحد
فيهم ستة عشر مربع صغير، طب هذا المربع الكبير اللي فيه
ستة عشر، إيش أبعاده؟ عبارة عن واحد millimeter في واحد
millimeter أبعاده؟ تمام؟ يعني، طيب فإذا لو أنا بدي
أجي أخد حجم المربع الواحد، عبارة عن .. طب الحجم هو
عبارة عن إيش؟ ضرب ثلاثة أبعاد، طول في عرض في ارتفاع، طيب
واحد millimeter طول، و عرض واحد millimeter، طول، طب
ارتفاعه قديش كان؟ كان هو اللي هو المسافة، أو البعد
ما بين الـ chamber و الـ slide، الـ cover slip اللي
محطوط تمام؟ فإذا .. حجم المربع هيكون واحد من عشرة
ملي متر مكعب، و بما إنّ السوائل بتأخذ حجم الإناء اللي
بتوضع فيه، تمام؟ إذا حجم السائل اللي أنا قرأته في
المربع هذا، هو حجم المربع، الطول في العرض في
الارتفاع، في كم مسافة، كم ما بين الـ chamber هذا و
الـ cover slip تمام؟ طيب، أنا عدّيت في أربعة مربعات،
يعني خلينا نحسب إنّه أنا عدّيت في منطقة واحدة من
الـ chamber، في أربعة مربعات، هيّهم، تمام؟ المنطقة
الواحدة من الـ chamber بتكون هيك مسطّرة، تمام؟
هي الـ chamber، المنطقة الواحدة بتكون هيك مسطّرة، زي ما
شفنا، و هنا كمان موجود أيضاً مسطّرة أخرى، طيب أنا
عدّيت فيه أربعة مربعات، معناها الحجم اللي حسبته
للمربع الواحد، بضربه فيه أربعة، ففي عندي الحجم لأربعة
مربعات هو عبارة عن أربعة في الواحد من عشرة
millimeter مكعب، و هيعطيني 0.4 من عشرة، أو
point أربعة millimeter مكعب، الـ millimeter مكعب هو
نفس الـ microliter، طيب
نفترض إنّه أنا عدّيت في أربعة مربعات، خمسين خلية تمام؟
في الأربع مربعات كان مجموع العدد خمسين، نفترض
افتراض، طيب الخمسين كانوا موجودين في حجم 0.4 من
عشرة، يعني ملي متر مكعب، طب كم بيكون موجود
في الواحد ملي متر مكعب؟ لإنه في النهاية أنا، وحدة
قياس الخلايا اللي هي عبارة عن cells، أو اللي هي الوحدة
لعد الخلايا، cells per micrometer مكعب، تمام؟ per
micrometer مكعب
مش موجود القص هنا، مش عارفة من وين أجيبه، ما علينا
ملي متر مكعب، أو ممكن تكون اللي هي عبارة
عن cells per microliter، تمام، per microliter، طيب أنا
في الـ microliter الواحد، كم بيكون موجود في الـ
millimeter مكعب الواحد، كم بيكون موجود خلايا، هذا
اللي بيلزمني، ففي النهاية أنا بعمل زي ضرب تبادلي، و
بطلع عندي الخمسين في واحد على أربعة من عشرة، طبعاً
الـ volume correction هو الواحد لأربعة من عشرة
فدايماً بضربه في، و في العدد الخلايا اللي بيطلع
معايا طبعاً، و هيك طبعاً بضربه كمان أيضاً في الـ
dilution factor، في الـ dilution factor طبعاً، و
بالنهاية بحصل على الـ total طبعاً، of White PCs تمام؟
إذا في النهاية أنا بيلزمني أكون عارفة أبعاد المربع
عشان أجيب الحجم، و .. و أجيب .. و الحجم بيلزمني
عشان أنا في النهاية بدي، بدل ما أحسب عدد الخلايا في
0.4 ملي متر مكعب، بدي أحسبه في واحد ملي متر
مكعب تمام؟ فبـ .. بـ .. بعمل يعني .. بضرب العدد في
مقلوب هذا الـ volume تمام؟ فهيك بكون جبت الـ volume
correction، طب، العينة مخففة، فعندي، فأنا بدي
العينة كـ .. كـ .. كـ .. الأصل، ما فيها عدد خلايا، فبدي
أضرب في الـ dilution factor، و احنا عرفنا دائماً
لما بدي أجيب الأصل، الـ original، بضرب في الـ dilution
factor، فإذا الـ total of white pieces count هيكون هو
عدد الخلايا اللي أنا عدّيتها في كم مربع؟ في أربعة
مربعات، عشان هيك لو أنا جبت يعني يا بعد في جهة
واحدة، يا إما بعد في الجهتين، و بقسم على اثنين، لإنه
لو عدّيت في الجهتين، هيكون في عندي ثمان قراءات، فأنا
بدي لأ، أنا بدي فقط أربعة قراءات، مجموع أربعة قراءات
تمام؟ مجموع الخلايا في أربعة مربعات فقط، لا غير، و
بضربه في الـ volume correction، و أيضاً في الـ
dilution factor، طبعاً هذه التفاصيل إن شاء الله ممكن
نوضحها أكثر في المعمل، و ننتقل إلى الـ discussion، أو
الجزئية اللي بتتعلق بصرْد .. صرد مصادر الـ error، و
كيف احنا نحلها، لو كان في عند الشخص عنده
leukocytosis، إيش يعني leukocytosis؟ يعني زيادة، high
أو elevated leukocyte count، عدد كبير، أو ارتفاع
كبير في عدد خلايا الدم البيضاء، معناها إيش بدي أعمل؟
بدي أعمل dilution أكبر، بدل ما أعمل dilution واحد
لعشرين، بعمل واحد لماية، dilution خارجي في الـ tube، مش
شرط أستخدم الـ Thaumapipet، لأنها مش هتوفر لي هذا الـ 609 00:4
عنده leukocytopenia ما عملت dilution كويس في حالات
الـ leukocytosis ما أخدتش الحجم الدم اللازم فإذا أنا
ما أخدتش كمية دم معبرة تمام، فبالتالي الفحص التابعي
أيضا مش راح يكون معبر، والنتائج انتباهتي مش راح
تكون دقيقة. failure to mix well إذا أنا ما عملت
mixing منيح للـ blood مع الـ .. الـ diluent. معناها
أنا برضه كمان هنا ممكن آخد concentrated أو آخد
مثلا دم مش مكسرة فيه الـ RBCs، فبالتالي هتعيق عملية
القراءة. failure to discard the first four drops لو
أنا ما اتخلصت من الأربع قطرات أو الثلاث قطرات اللي
بيكونوا موجودين في أول الجزء من الـ chamber. بعيبة اللي
هو الـ stem. معناها أنه أنا لما هأجي أملأ الـ chamber
هاملاه فيهم هدول القطرات، يعني هاملأه بـ تركيز
solution لحال، مش راح يكون في عندي عينة كافية على
الـ chamber، فبالتالي هيكون الـ white blood cells count
قليل نتيجة أن أنا ما حطيتش عينة كفاية. failure to .. و
أيضا كمان الـ dilution تبعي هيكون فيه خلال. failure
to barely charge the counting chamber لو أنا
ما مملقتش الـ chamber بطريقة صحيحة، أيضا كمان راح يكون
في عندي خلال، لإن زي ما أنتم شايفين الحسابات تبعتي
بلزمني الحجم اللي كان .. الحجم الـ blood اللي هو
حجم المربعات اللي كان يملأها الـ blood، تمام؟ و
علشان أحصل على volume correction، وبلزمني أيضًا
dilution factor عشان أحصل على اللي .. اللي هو
الصيغة كاملة. failure to properly charge the
counting chamber إذا أنا ما مملقتش الـ chamber بشكل
منيح، معناها القانون اللي أنا بأطبقه خطأ و مش معبر
فبالتالي نتائجي فيها خطأ. أيضا كمان في عندي مشاكل
تانية لـ الـ error أقل شيوعا، ولكن ممكن تكون
موجودة. الـ pipette بتكون فيها مشكلة مثلا، أو الـ chamber
فيه مشكلة، يكون inaccurate، تستيرته خطأ، أبعاده،
الـ pipette فيها مشكلة، انكسرات، سدادات أو إشي، moist
or unclean. الـ pipette إذا كانت الـ .. الـ pipette من جوا فيها
مبللة أو فيها سائل أو مش نظيفة، أيضا كمان هذا ..
يعني إشي راح يشغل حيز، و بالتالي راح يأثر على الحجم
و يأثر على الـ dilution تبعي. excessive pressure in
finger لو أنا أخدت عينة من الـ .. الـ finger من الـ
skin puncture و عملت pressure، يعني ضغط جامد، فمعناها
أنا بكون عم بطلع عصارة خلايا شجوس، فبالتالي الـ
blood هيكون diluted، فبالتالي مش هيكون أيضا معبر.
هأحصل على reduced أو low white blood cells count too.
little or too much diluting fluid لو أنا حطيت
diluting fluid بكميات كبيرة أو بكميات قليلة، هذا
يأثر على الـ dilution. slowness in manipulation وهي
نقطة مهمة، أنه نسرع أو أنه نكون هيك يعني، كيف دي
أحكيها ناشطين، يعني أنه مش بطيء في الخطوات، و روح
نفارطة لأ، لإنه فعليا مثلا لو أنت بدك تاخدي عينة من
الـ skin puncture عشان تعبي فيها الـ chamber، لو أنت ما
أسرعتيش و حطيتيه و على طول ملأتي الـ blood للنص، وراه
على طول مباشرة حطيتِ الـ diluent، الدم رح يتجلط لإن
أنت عم تاخديه مباشرة من الـ skin puncture، يعني
ما فيش anticoagulant في الموضوع، فممكن يتجلط و يسدد
الـ chamber. لو كان في الـ .. في الـ chamber
air bubbles، برضه كمان معناها في مشكلة، فلذلك لازم
أنا أتحكم بنفسي منيح، و أنا عم باخد الـ volumes، و
أيضا كمان لما أفوت الـ pipette مثلا في solution
أفوتها بشكل عمودي، يعني في tricks هتريح تتعلموها
بالشغل العملي، كيف أنت تمنعي حدوث الـ air bubbles أو
يعني ظهور الـ air bubbles في الشغل. برضه كمان الـ
air bubble في الـ counting chamber هتأثر على الحجم
اللي أنا عم بعده، فبالتالي ممكن تعطيني error إذا
كان الـ .. الـ .. الـ chamber مش نظيف مثلا، أو في
المحلول تبعي مش نظيف، مثلا في yeast أو fungi أو فطر
معين، عفن في المحلول، أو حتى كمان ممكن يكون على الـ
chamber، ما .. عليه غبار، أو ما مسح كويس، فبالتالي
هذا هيأثر، لإن هتعيق عملية العد، هذه الغبار و الـ ..
الـ contamination. Presence of many nucleated red
cells causing a high white cell count إذا كان في
عندي العديد من الخلايا الـ .. الـ red blood cells nucleated
تمام، معناها هذا هيعطيني error، فلذلك، أو إذا كان أنا
بشتغل white blood cells count مع blood film مع بعض، و لمحت
في الـ blood film nucleated red blood cells، على طول لازم
أروح أطبق قانون الـ corrected white blood cells count
mistakes in counting or calculation إذا كان أنا
طبقت القانون غلط، مثلا يعني هنا حطيت الـ N تكون
اللي هي مجموع عدد الخلايا في الـ 8 مربعات مثلا، أو
في 3 مربعات غلط، إذا أنا عديت في 8، يعني عديت في
الجهتين فوق و تحت، لازم أقسم على 2، لازم هذا يكون الـ
number of cells، هو مجموع الخلايا في الأربع مربعات
تمام؟
أو حتى في الحسابات، يعني مثلا ما جبت الـ correction
volume أو الـ volume correction صح، ما جبت الـ
dilution factor بشكل صح، دي برضه كمان رح يأثر، بهيك
بنكون وصلنا لنهاية محاضرتنا لليوم، أتمنى أنها تكون
واضحة و مش صعبة عليكم، يعطيكم ألف عافية