الرحمن الرحيم موضوعنا إن شاء الله رب العالمين رح
يكون بما يتعلق بالـ Special Stains الـ Special
Stains هي مجموعة من الصبغات الخاصة اللي بتتم
التفريق بين الـ blood cells من خلالها بحيث إنه في
عندي أصباح بتصبح أنواع معينة من الخلايا دون عن
الخلايا الأخرى احنا اليوم راح ناخد مع بعض مجموعة من
الصبغات يعني مش راح ناخدها كلها لكن راح ناخد
الأكثر شيوعا اللي بيتم الـ classification لأنواع
اللوكيميا المختلفة بناءً على اللي حكينا عنها أو
اللي هي الصبغات الـ cytochemical reactions in acute
leukemia كثير الـ specialists هذه بتفيدني في
تصنيفات الـ acute leukemia المختلفة عندي هنا ملخص
للـ Special Stains كلها إحنا هذا هناخده إن شاء
الله بالتفصيل في المحاضرة أول
صبغة بدنا نحكي عنها اللي هي Leukocyte Alkaline
Phosphatase طيب خلينا ناخد .. يعني ناخد فكرة أو
نبدأ إيش يعني Special Stains أو إيش الفكرة اللي
بتعتمد عليها الـ Special Stains الـ Special
Stains يا بنات أنا ببساطة بضيف كاشف Indicator الـ
Indicator هذا بيدل على وجود شيء معين في الخلايا
هذا الشيء قد يكون أنزيم قد يكون Lipid قد يكون
Glycolipid مثلًا أنزيم أه فبدأ أضيف لهذا الانزيم
Substrate بحث إنه يتفاعل معاه ويعطيني لون والله
إذا صار عندي لون معنى الكلام إن الخلايا موجود في
هذا الانزيم إذا ما أعطاني لون معنى الكلام إن
الخلايا مش موجودة في هذا الانزيم تمام؟ الآن كل نوع
من أنواع الخلايا من الـ Maturation Series المختلفة
بتلاقي فيها إنزيمات ومركبات مختلفة عن النوع الثاني
من خلالهم أنا بتعرف على نوع الخلية يعني مثلًا الـ
Myeloid cells فيها إنزيم شهير اللي هو الـ
Myeloperoxidase فإن إذا حطيت الكاشف بتاع الـ
Myeloperoxidase وعطاني لون يعني الخلية Myeloid
تمام؟ إذا ما أعطاني لون معنى الكلام إنها مش
Myeloid هذه هي الفكرة العامة للـ Special Stain
بنفرق من خلال شيء معين بيكون موجود بالخلايا أول
صبغة بدنا نحكي فيها اللي هي Leukocyte Alkaline
Phosphatase Leukocyte Alkaline Phosphatase همن
الإسم هو عبارة عن Leukocyte Alkaline Phosphatase هو
عبارة عن إنزيم موجود بداخل الـ Leukocyte هذا
الإنزيم بزيد في حاجة تسمى الـ Leukemoid Reaction
تمام؟ إيش هو الـ Leukemoid reaction؟ إحنا بنعرف لما
بيصير Infection مثلًا Bacterial Infection بتصير
حالة الـ shift-left بتصير البونمارو بيصير يطلع
band cells وممكن ترتفع في الـ peripheral blood لكن
في بعض الأحيان بيصير Infection فبتكون ردة فعل
البونمارو مبالغ فيها كيف يعني؟ يعني هيطلع عندي
كميات من الـ Myeloid cells الـ Immature هيطلع عندي
Band و Metamyelocyte و Myelocyte و Myelocyte
و Myeloblast لما أشوف الخلايا هذه بهذه الكمية في الـ
Peripheral blood هيتبادر لذهني أنه ممكن يكون هذا
مريض لوكيميا اللي هي حالة الـ CML Chronic Myeloid
Leukemia ليش؟ لأن الـ Chronic Myeloid Leukemia
بتعطيني نفس هذه الـ picture بلاقي هي Myeloid خدوا
بالكم فهلاقي فيها كل الـ Mature Forms بتاعة الـ
Myeloid Cells طيب، الآن أنا في عندي مشكلة هل الـ
Blood Film اللي قدامي CML ولا Leukemoid Reaction؟
الـ Leukemoid Reaction بيتميز بإنه فيه زيادة في
إنزيم الـ Leukocyte alkaline phosphatase في
الخلايا بينما الـ CML هتلاقي فيها Decrease في
الإنزيم Activity إذا أنا بدي أكشف أول حاجة عن
الإنزيم وأشوف قداش كمية الإنزيم هل هي زيادة أو
فيها نقصان طبعًا الإنزيم هجيبله Substrate الـ
Substrate اللي هستخدمه نفطول ASMA أو نفطول ASBI في
وجود الإنزيم الموجود بقلب الخلايا في ظروف Alkaline
pH بيعطيني Hydrolyzed Substrate الـ Hydrolyzed
Substrate هذا بضيفله مادة ثانية اللي هي Fast blue RR
dye بيعطيني insoluble precipitate على مكان الـ
enzyme activity يعني إذا كان الـ enzyme موجود هيتم
هذا التفاعل ويتكون عندي Red precipitate تمام؟
Alkaline Phosphatase ممكن يكون الـ Precipitate رد أو
لون ثاني حسب الـ Indicator اللي أنا بحطه هنا Blue
Fast Blue Dye فهيظهر عندي Blue Alkaline phosphatase
activity is present in varying degrees in the
neutrophil-unbound form of granulocyte sometimes
in B lymphocyte فما يعني هكذا إذا كان الإنزيم
موجود بده يكون عندي لون طيب هو الإنزيم موجود موجود
في الحالتين موجود في الـ CML وموجود في الـ Leukemoid
reaction طب كيف بدي أقيم هل في زيادة في نشاط
الإنزيم ولا في نقصان؟ خلّيني أشوف هنا في عندي
صورة بوضّح لك كيف الـ lab reaction positive وكيف
negative هنا الحبيبات أو الـ cytoplasm تاع الـ
neutrophil مصبوخ بالصبغة الزرقاء دليل على إن فيها
إنزيم activity بينما هنا negative إن الخلايا مافيش
فيها enzyme activity طبعًا
احنا قلنا بدنا نقيم قداش في عندي تلون أو قداش في
عندي نسبة من الانزيم فإيش بروح بعمل؟ بنروح بنعد
100 neutrophil تمام؟ وكل خلية بنعطيها درجة درجة من
4 كيف يعني؟ يعني الخلية اللي مش مصبوغة بقول عنها
Zero Thin Stain بقول عنها plus one Moderate Stain
plus two Strong Stain plus ثلاثة Strong Stain
without cytoplasmic background إيش يعني؟ يعني مقدر
مستبغى غامقة مغطية كل الـ cytoplasm مش مبين تفاصيل
للـ cytoplasm هذه plus four قالت أنا فيه عندي 100
خلية كل خلية أعطيتها درجة من الدرجات هذه في
النهاية بدي أروح أجمع الدرجات الـ Normal Range من
30 إلى 185 لو زاد عن هيك ممكن يكون Leukemoid
reaction لو نقص عن 30 ممكن يكون CML تمام؟ واضح
كيف؟ لو زادت الـ enzyme activity بيكون Leukemoid
reaction لو نقصت بيكون CML هنا
بقول لك الحالات اللي بترتفع فيها Leukemoid reaction
والحالات اللي بنقص فيها الـ CML هم هدول أهم اثنين
يعني بستخدم الـ lab reaction في أني أفرق بينهم في
عندي حالات ثانية ممكن يرتفع فيها فهذه بتكون ك
interfering factor في النتيجة بتاعتي كعوامل تؤثر
على النتيجة زي حالات الـ pregnancy الـ polycythemia
vera حالات الـ aplastic anemia في حالات الـ multiple
myeloma حالات الـ obstructive joint disease في حالات
الـ Hodgkin disease بنقص في حالات الـ BNH سيكلسي
الأنيميا في حالات الـ Hypophosphatasia بس أنا أهم
شيء التفريق ما بين الـ Leukemoid reaction والـ CML
هدول قد يكونوا interfering factors كيف يعني
interfering factors؟ يعني لو كانوا هذه يعني في حالة
من الحالات هذه موجودة أنا ممكن ما أقدر أحكم على
النتيجة إنها «Elevated» ليش؟ لأنه ممكن يكون
الـ Pregnancy هو اللي رفعها مش الـ Leukemoid
Reaction، تمام؟ فبالتالي هذه الحاجات ممكن تكون
كـ Interfering Factors بس ما .. يعني ما بستخدم
الـ Lab Reaction عشان أشخصها بُستخدم عشان أشخص أول
اثنين الـ PG
للصبغة الثانية يعني أنا باعتبر أن هذه صبغة أول صبغة
بيعملوها أو أول ما بيجي مريض Acute Leukemia بيعملوله
الـ Peroxidase ثاني و بيصنفوا يا Peroxidase
positive يا Peroxidase negative ليش؟ لأن
الـ Peroxidase هذه بتفصل الـ myeloid والـ monocytic
عن الـ lymphocytic يعني كيف؟ الـ myeloid والـ
monocytic هيعطوني positive بينما الـ lymphocytic
هتعطيني negative إذن أول صبغة اللي هي الـ
Peroxidase أو بيسمى بالـ «مييلو بيروكسداز» واللي
بتميز ما بين الـ Myeloid والـ Monocytic cells
بتفصلها أو بتمايزهم عن الـ Lymphocytic cells الآن
الـ Peroxidase هو عبارة عن إنزيم من اسمه إنزيم موجود
في الـ Primary Azurophillic granules للـ Neutrophil،
Eosinophil ومونوسايت Activity increase with
maturation No activity is found in red cells or
lymphocyte يعني لا موجود في الـ RBCs ولا موجود في
الـ lymphocyte طيب الـ Peroxidase هذا الـ Substrate
بتاع الـ hydrogen peroxide في وجود الـ benzidine
derivatives الـ benzidine derivatives هذه بتستقبل
جزيء هيدروجين فبتعطيني insoluble red brown
precipitate موجود في مكان التفاعل اللون مش شرط يكون
Red Brown حسب الـ Benzidine الـ derivative اللي
أنا بستخدمه هنا هيتكون عندي لون يعني بيختلف من
كتلة كتلة من صبغة إلى صبغة عندك نتيجة
Myeloperoxidase أنت مش هتشوفه خلايا مصبوغة
بألوانها زي ما عملنا في الجميزة والنشمن لأ هتكون
عندك خلايا يا إما فيها Granules بتدل على إنها
مصبوغة زي هذه تمام؟ وفي عندي خلايا زي اللي هنا هذه
مش مصبوغة تمام؟
هنا الصبغة Blue وهنا Red Brown حسب الـ Substrate
اللي أنا بستخدمه أو العامل المساعد مع الـ Substrate
اللي أنا بستخدمه التفاعل Hybromero
مصبوغ بالـ Myeloperoxidase الخلايا Myeloperoxidase
positive
طيب، الآن الـ Red Brown Peroxidase بشوفه فيه الـ
Neutrophil والـ Eosinophil في المراحل Promyelocyte،
Myelocyte، Metamyelocyte يعني في الـ Myeloid الـ
Immature cells طيب، ممكن أشوف Fine Granules في الـ
Monocyte كويس؟ Fine Granules في الـ Monocyte الـ
Negative بشوفه في الـ Lymphoblast في الـ Basophil
في الـ Plasma Cell في الـ Erythroid كمان في الـ
Myeloblast الـ Early هلاقي يا بنات الـ
Myeloperoxidase هذا بيبدأ يتكون في الـ Myeloblast
بس الـ Myeloblast إذا كانت Early Myeloblast يعني
Very Early لسه ما بدأ يتكون فيها بتعطيني Negative
في Late Myeloblast هيبدأ يبين الـ Myeloperoxidase
على إنه Positive تمام؟ هلاقي إذا كنتوا فاكرين
تصنيفات اللوكيميا من M0 لـ M7 إيش الفرق من M0 و
M1؟ M0 الـ Myeloblast اللي موجودة فيها Early
Myeloblast هتعطيني Myeloperoxidase Negative بينما
الـ M1 Late Myeloblast هتعطيني Myeloperoxidase
Positive هي الفرق بين الاثنين إن واحدة فيهم
Myeloperoxidase Negative واحدة فيهم Myeloperoxidase
Positive
الملاحظة يعني أنا مش حاكيها لكم إياها عشان تحفظوها
الملاحظة هذه بتقول لك إن Acute Leukemia Infection
and MDS Neutrophil show negative stain يعني احنا
مفروض الـ Neutrophil المفروض تعطيني Positive لكن
في بعض الحالات زي الـ Acute Leukemia Infection MDS
ممكن تعطيكي Positive ممكن عفوا تعطيكي Negative هذا
بس بدي أقول لك إنه لكل قاعدة شواذ عشان هي أحيانًا
Positive في الـ Myeloperoxidase و Positive في
السودان بلاك طبعا الـ Hour Rod من الحاجات المميزة
للـ Myeloid Leukemia الـ Monocytic cells show
finely scattered granules المونوسايت هتعطيكي
finely granules الليمفوستيك سيلز يعني الليمفويت
سيلز بتعطيكي negative ما عدا نوع واحد من الخلايا
اللي هو موجود في الـ L3 في الـ Burkitt lymphoma
الـ Burkitt lymphoma cells هذه بتتميز بإن فيها
فجوات فيها دهون فيها fat فلما باجي بضيف عليها صبغة
الـ Sudan Black هتاخد اللون الأسود عشان هيك هو هذا
الاستثناء الوحيد من الـ lymphocytic cells اللي
بيعطيكي positive اللي هو حالة الـ acute
lymphocytic leukemia L3 أو ما يطلق عليه اسم
Burkitt's lymphoma نيجي
إلى نوع تاني اللي هو non-specific esterases هذابدو
يفصل عند الـ Myeloid عن الـ Monocytic احنا اول اشي
التنتين مع بعض اعطوني positive هلأ بدأ افصلهم عن
بعض الـ YPCs containing esterases مجموعة من الـ
Lysosomal enzymes باضيفلها Substrate Alpha
-Naphthylacetate في وجود الـ Non-specific esterase
هتعطيني Naphthyl compound الـ Naphthyl compound
بضيف عليه الباريارسينولين بيعطينا رد بريسبيتات إذا
كان الإنزايم موجود إنزيمات هذه موجودة هتعطينا رد
بريسبيتات تمام؟ إذا الصبغة هذه هتفصل الـ Myeloid
عن الـ Monocytic بس خدوا بالكم هنا في عندي ملاحظة
With Fluoride Inhibition قلت راح نفهم إيش يعني
With Fluoride Inhibition طبعاً هذه الصورة لـNon
-specific esterase positive With Fluoride Inhibition
With Fluoride Inhibition هلقيت بقولك الـ Positive
Brick Red Staining موجود فيه مجموعة كبيرة من
الخلايا الـ Positive Color موجودة فيه
Megakaryocyte، في الـ Platelets، في الـ Histocyte
في الـ Macrophage، في الـ Monocyte، في الـ
Lymphoblastic كل هدول بيعطوني Positive بما فيهم من
الـ Monocyte بما فيهم من الـ Monocyte لكن لأن الـ
Macrophage هي الـ Monocyte يعني الـ Monocyte و الـ
Macrophage نفسها الـ Monocyte لما بتنضج بتصير
Macrophage فما علينا بينما بتعطيني Negative للـ
Granulocyte إذن هي أتتني Negative للـ Granulocyte
الـ Myeloid فصلتهم عن الـ Monocyte بس الـ Monocyte
طلع معها كبشة طلع معها كمية كبيرة Positive كيف بدي
أميز الـ Monocyte عنهم؟ بقولك لو أنا أضفت Fluoride
للـ Reaction بس الـ Monocyte تعطيك نيجاتيف
والباقيين هيضلوا يعطوا positive تمام؟ إذا إذا
أعطاني positive من البداية احتمال واحدة من هدول
كلهم لكن لو أعطاني .. أضفت Fluoride وأعطاني
negative هتكون Monocytic Series الخلية جاية
Monocyte تمام؟ لكن الباقين هيضلوا يعطيكوا positive
حتى لو أضفت Fluoride إذا بين أسان افهمنا إيش يعني
With Fluoride Inhibition يعني هو الإنزايم بتاع الـ
Monocyte بيصيرله Inhibition في وجود الـ Fluoride
بينما الباقين مابيصيرلهماش Inhibition تمام؟
نيجي للـ Specific Esterase أو Chloroacetate الـ
Chloroacetate برضه يعني بيفصل الـ Myeloid عن الـ
Monocyte زي تعزيز للفحص الأولاني نفطر الـ AS
Chloracetate esterase نفسها الـ Fast blue BB
بيعطيني blue precipitate النتيجة هنا معكوسة كيف
يعني؟ يعني الـ Myeloid هتعطيكي positive ومعينما
الـ Monocytic هتعطيكي negative بغض النظر positive
أو negative لأن هما التنتين انفصلوا عن بعض other
cells زي الـ lymphocyte، plasma cell،
megakaryocyte، nucleated RBCs كل هذا هيعطينا
negative الأول رد بيعطيك positive في الـ specific
esterase يعني معنى الكلام إن الإنزيم موجود في الـ
primary و الـ granules بدليل إن الـ myeloid cells
أعطتني positive myeloid cells فيها الـ granules
طبعاً ثورة
لـ specific esterase positive cells
طيب نيجي للـ Periodic Acid Schiff Reaction الـ
Periodic Acid Schiff بيعطيني عادة positive مع الـ
lymphoid leukemia مع الـ acute lymphoid leukemia
يعني إذا قلنا الميولايد بتعطيني MPA positive
الليمفايد بتعطيني BAS positive تمام؟ الميولايد
بتعطيني BAS negative الليمفايد هتعطيني
Myeloperoxidase negative هعيد تانيمين positive في
الـ lymphoid الـ BAS positive والـ MPA negative في
الـ myeloid الـ MPA positive والـ BAS negative إذن
diagnosis of acute lymphocytic leukemia تعطيني
positive الآن مين في الـ myeloid بيعطيني positive
الـ erythroid cells بس اللي هي الـ M6 الـ M6 تمام،
بس الـ M6 طيب، نشوف الـ Principle الـ Principle هنا
بتقولك إن الصبغة هذه اللي هي الـ Periodic Acid في
وجود Schiff Reagent هتتفاعل مع الـ Mucoprotein، الـ
Glycoprotein و High Molecular Weight Carbohydrate
في الـ Blood Cells الموجودة في خلايا الدم و
هتعطيني Red Precipitate الـ Glycoprotein في وجود
الـ Periodic Acid هتعطيني Aldehydes الألدهيدز
هتتحول بالـ Schiff Reagent إلى Red Precipitateلذالن وجد
الرد برسبتات إما لمفايد أو إرثرايد من M6 إما
لمفايد أو إرثرايد من M6 هنا
نيجي للليفت Giant Multinucleated Late Normoblast
هذه يا بنات اللي فيها أنوية كتيرة هذه عبارة عن
Normoblast abnormal يعني Orthochromic Normoblast دي
آخر مرحلة قبل ال reticulocyte بس هي في ال M6 بيصير
هذه الشغلة بيصير Multinucleated Normoblast تمام
هنا موجود واضح لبريسبيتات في الخلايا الصبغة طبعا
هذه هو بيقولنا إنها Normoblast واضح؟ زي ال M6 هذه
الحالة وبرضه نفس الأشي في ال lymphoid هتعطيني
positive
هذه برضه اللي عاليمين في الـ M6 في اللي عالشمال في
الـ ALL الـ Acute Lymphoid Leukemia نيجي
للـ Acid Phosphatase بين أثنين with tartrate
resistance الـ Acid Phosphatase بيستخدم بشكل أساسي
عشان نشخص الـ Hairy Cell Leukemia الـ Acid
Phosphatase إنزيم موجود في الـ Myeloid في الـ
Lymphocytic، في الـ Monocytic، في الـ Plasma يعني
هو موجود في أكتر من نوع من الخلايا، تمام؟ لكن الـ
Enzyme اللي هو الـ Acid Phosphatase اللي هو
Isoenzymes، يعني fractions أو أجزاء أو أنواع من
الـ Enzyme في عندنا Zero وOne وTwo وThree A وThree
B وفي عندنا Isoenzyme Five، تمام؟ الآن وجدوا إنه لو
أنا أضفت على الـ Reaction هذه الـ Reaction تبع
الأنزيمة بالمناسبة اللي هو Naphthol ASBI Phosphate
Acid الـ Acid Phosphatase في وجود الـ Fast Blue B
هيعطيني Naphthol نفثول في وجود البرأر سنلين هيعطيني
الـ Recipitate طيب، هذا التفاعل بيمشي لكل الـ
Isoenzymes و لكل أنواع الـ Acid Phosphatase لكن لو
أنا أضفت مادة الـ L-tartrate L-tartrate تمام؟ كل
الـ Isoenzymes هذه هيصيرلها Inhibition و هيعطيني
Negative بينما الـ Isoenzyme 5 هيعطيني Positive مش
هيصيرله Inhibition طب الـ Isoenzyme 5 هذا وين
موجود؟ موجود بالـ Hairy Cell بمعنى لو أعطاكي
Positive ممكن يكون أخد هذه الخلايا لو حطيت L-tartrate
و ضلوا يعطيكي Positive معناه الكلام إن الحالة
قد تكون Hairy Cell Leukemia و بنستفنى الأشياء
التانية كلها لأن بيصيرلها Inhibition بالأنزيم
الأشياء التانية هذه تمام؟ هي
عندك Hairy Cells أصلا الـ Hairy Cells بتبين من غير
اللي هى مميزات من غير special stain يعني لو طلعنا
كويس هنلاقي اللي هى projections سموها hair-like
projections عشان هيك أتى أسمها hair cell هي نوع من
أنواع الـ chronic leukemia chronic lymphoid
leukemia نيجي
لآخر واحدة اللي هى ال iron stain أو Prussian blue stain
بروشيان يعني Prussian blue stain يمكن في بداية ال course لما
أخدنا ال RBCs morphology حكينا عنها حكينا إنها
بتصبغ ال particles بتاعة ال iron الموجودة في
الميتوكندرية صح؟ إذن Siderotic granules are found
in the cytoplasm of developing cells in bone
marrow in the form of فرق فبيبقى الحديد موجودة في
صورة فرق كمخزون في ال bone marrow precursors تمام؟
الحديد في وجود Prussian blue pairs reagent
هتعطيني الـ blue color يعني الـ pairs reagent هذا
من إيش بتكون؟ بتكون من Potassium Ferricyanide و HCl
Potassium Ferricyanide مع HCl هيعطوني مع الفرق الـ
blue color Siderotic granules are found in
nucleated RBCs ممكن أشوفها في بعض الـ reticulocyte
الصدر تيكي جرانيولز هاي زي ما أنتوا شايفين موجودة
في الـ Enucleated Erythroblasts بستجمعها بهذا الشكل
حوالين النوا بخليني أسميها Ring Sideroblast هذه
الخلية اللي متجمعة على شكل حلقة الحبيبات حوالين
النوا تسمى بالـ Ring Sideroblast فلقيـت الـ Ring
Sideroblast هذه تعتبر علامة مميزة وتشخيصية لحالات
الـ Sideroblastic Anemia نوع من أنواع الانيميا
بيسموه Sideroblastic Anemia تمام؟