السلام عليكم ورحمة الله وبركاته، يعطيكم العافية
جميعًا، إن شاء الله، اليوم محاضرتنا بعنوان Hemoglobin
A1c أو ما يسمى polyglycated hemoglobin أو
polyglycosylated hemoglobin، اللي هو فحص مخزون
السكر. نحكي عن الـ Introduction: «Diabetes mellitus
as previously stated, is a condition of
hyperglycemia». كلنا عارفين أن مرض السكري، ومرضى
السكري يعانون من الـ hyperglycemia، ارتفاع مستوى
السكر في الدم. It is estimated that this condition
affects 2.5% to 5% of the population and is
considered to be the fifth leading cause of death
in the United States. بيحكي لي إن مرض السكري أثر على
2.5% إلى 5% من الـ population، يعني أثر على حياة ناس
كتيرة في العالم، ويُعتبر مرض السكري هو خامس سبب يؤدي
إلى الوفاة في الـ United States، في الولايات المتحدة
الأمريكية. صنّفوا إنه مرض السكري هو خامس سبب يؤدي
إلى الوفاة، تمام؟ The disease is associated with a
number of serious micro- and macrovascular
complications involving the eyes, kidneys, heart,
and blood vessels. وربما بشكل كبير يقلل قيمة الحياة
أو يقلل عمر الحياة للشخص الذي كان مصابًا. بيحكي لي إنه
مرض السكري، المشكلة مش في المرض يعني، المرض يعني مع
الوقت الإنسان بيتعامل معه، بياخد إبر إنسولين،
بينظمّه. المشكلة في الأشخاص اللي ما بيحافظوا على
سكرهم على المدى البعيد. مريض السكري بيصير عنده
complications، بيصير عنده مضاعفات. المضاعفات هذه
نوعين: يحدث عنده microvascular complication أو
macrovascular complication. لما أحكي microvascular
complication، هذه المضاعفات تشمل ثلاث شغلات ممكن
يصير عنده: الـ neuropathy، مشاكل في الأعصاب، في
النيورونات، أو Nephropathy، مشاكل في النفرون، أي في
الكلية، أو ممكن يصير عنده Retinopathy، مشاكل في
الشبكية تبع العين. إذًا، الـ Microvascular
Complication: إما بيصير عنده مشكلة في الأعصاب أو في
الكلية أو في العين. أما الـ Macrovascular Complication،
هذه مضاعفات كبيرة شوية، بيصير عندهم على المدى
البعيد مشكلة في الـ heart and blood vessels، مشكلة في
القلب والأوعية الدموية. كل هذه الـ Complications،
المضاعفات، بتقصر من عمر الإنسان وتُسرّع في إحداث
الوفاة. بنكمل بالـ Introduction: «There is a
relationship between control of the glucose
concentration fluctuation and the progression of
the disease complications». هناك علاقة ما بين تنظيم
مستوى السكر في الدم وما بين حدوث الـ complications
على المدى البعيد. يعني مثلًا شخص مريض سكري، تمام؟ هذا
مريض السكري، لو حافظ على نفسه، اتبع حمية غذائية
كويسة، أخد الإنسولين بالموعد المناسب، معنى الكلام
احتمال وصوله إلى الـ complications، لمرحلة المضاعفات،
هتكون نادر، ما يصير عنده مضاعفات. أما شخص ثاني مريض
سكري، ما بيعمل control عن نفسه، يعني ما بيحافظ على
نفسه، وبيكثر كثير في الأكل، وما بياخد جرعات
الإنسولين، وبالتالي مستوى السكر دائمًا بيكون عنده
عالي كثير في الدم، وما فيه تنظيم. هذا الشخص، احتمال
وصوله إلى complications، للمضاعفات، هيكون سريع، سريع.
حيصير عنده مضاعفات، وبعد هيك حيؤدي ذلك إلى الوفاة.
إذًا، هناك علاقة ما بين المحافظة على مستوى السكر في
الدم وما بين الوصول إلى complications. There should be
a method to quantify accurately and objectively
the degree of altered blood glucose control over a
long period of time. عشان هيك لابد من إيجاد طريقة،
من إيجاد فحص، هذا الفحص يعني أنا أعمله باستمرار
لمرضى السكري، وهو فحص الـ Hemoglobin A1c، مخزون السكر.
عادة بنعمله كل ٣ أشهر. كل ٣ أشهر بنحكي لمريض السكري
روح للعيادة واعمل مخزون السكر، عشان نشوف كيف هذا
الفحص بيحكي لي كيف كان السكر عند هذا المريض قبل ٣
شهور سابقة، يعني قبل ٣ شهور كيف كان وضع السكر عند
هذا المريض. إذا أنا من خلال هذا الفحص بدي أعمل
مراقبة لمريض السكري، بدي أشوفه قبل ٣ شهور كيف كان
وضعه، كان بياكل أو لا حاجة بنفسه؟ كان ملتزم بجرعات
الإنسولين أو لا؟ تمام؟
الـ Glycosylated Hemoglobin أو ما يسمى بالـ Glycated
Hemoglobin أو Hemoglobin A1c، يعني مخزون السكر. هذه
كلها مسميات لفحص مخزون السكر. In adults, Hemoglobin
is a mixture of three forms: Hemoglobin A1،
Hemoglobin A2، Hemoglobin F. With Hemoglobin A1
predominating. أخذناها في الـ Hematology، إن
الـ hemoglobins الأساسية اللي موجودة جوا خلايا
الدم الحمراء هما ثلاثة: Hemoglobin A أو ما يسمى باسم
آخر له Hemoglobin A1، بدل ما يحكوا A لحالها بيحكوا
A1. Hemoglobin A1، Hemoglobin A2، Hemoglobin F.
وحكينالكم برضه إن Hemoglobin A أو ما يسمى بـ
Hemoglobin A1 موجود بأعلى تركيز جوا الـ RBCs، هو
الغالب، الـ predominant، هو اللي موجود بنسبة أكثر
من Hemoglobin A2 و Hemoglobin F. هلّجيت Hemoglobin A1،
اللي هو Hemoglobin A، consists of three sub-forms.
برضه جوا الـ RBCs، عندي أنواع ثلاثة من Hemoglobin
A1، إيش همّ؟ Hemoglobin A1a، Hemoglobin A1b، and
Hemoglobin A1c. إذًا هذا الـ Hemoglobin اللي موجود
بنسبة عالية في الـ RBCs، اللي هو Hemoglobin A1، في
منه subform، في منه أيضًا أنواع مختلفة، في منه
Hemoglobin A1c، و Hemoglobin A1b، و Hemoglobin A1a.
تمام؟ وحكيلكم هنا إن هيموجلوبين A1c هذا الـ
predominant، هو اللي موجود أيضًا بأعلى نسبة جوا
الـ RBCs. The term glycated hemoglobin describes a
chemically stable conjugate of any of the forms of
hemoglobin with glucose. لما أحكيلكم إيش يعني
glycated hemoglobin أو glycosylated hemoglobin،
معناه الـ hemoglobin مرتبط بالجلوكوز، بكل بساطة.
Glycated hemoglobin، معناه إنه الـ hemoglobin جوا
الـ RBCs مرتبط بالسكر، بالجلوكوز، تمام؟ عملية
ارتباط الهيموجلوبين عملية بطيئة، غير إنزيمية،
ومستحيلة في الحركة، مرتبطة بالتركيز الجلوكوز في
الدم. الفكرة بتصير إن خلايا الـ RBCs جواها الـ
subforms، الـ hemoglobin، أشكال hemoglobin A1، في منه
أنواع: A1a، A1b، A1c. هذه الأنواع كيف بتتكون أصلًا؟
اللي بيصير إن الـ RBCs جواها Hemoglobin A1، و A2، و
Hemoglobin F. بدخل سكر، جزيئات من السكر بتكون موجودة
في الدم، بتروح وهي داخلة جوا خلايا الدم الحمراء،
جوا الـ RBCs، وجوا الـ RBCs بيصير عندنا عملية اللي
هي ربط السكر بـ Hemoglobin A1، اللي هو اللي موجود
بأعلى نسبة. ونتيجة ربط السكر بـ Hemoglobin A1، بتكون
عندي الـ subforms الثلاثة اللي حكينالكم عنهم: الـ
Hemoglobin A1a، الـ Hemoglobin A1b، الـ Hemoglobin
A1c. هدول جايين من دخول السكر لخلايا الـ red blood cells
وارتباطه بالـ Hemoglobin A1، تمام؟ وهذه العملية، ربط
السكر بهيموجلوبين A1 وتكوين الـ subforms، عملية تحدث
بشكل بطيء، slowly، و non-enzymatic، بتسير بشكل طبيعي
في الجسم، ما بدها أي إنزيمات، وبشكل irreversible،
يعني لما يدخل السكر جوا الـ RBCs، هذه عملية طبيعية
بتسير في الجسم. لما يدخل السكر جوا الـ RBCs، ويربط
بالـ hemoglobin A1، عشان يعطيني الـ subforms الثلاثة:
A1a، A1b، A1c. هذه الـ hemoglobins، الـ subforms، لما
بتتكون، بتصير irreversible compounds، يعني مركبات
ما بتفك، مستحيل بعد هيك السكر ينفك عن الـ
hemoglobin. خلاص بيضل السكر رابط بـ Hemoglobin A1،
ومعطيني subforms مختلفة، تمام؟ آخر جملة في الشرح
الخاصة بهذه العلاقة، هناخدها قدام، ونفهمها. هلّجيت، حكينالكم
إنه هذه عملية طبيعية، إنه جزيئات من السكر في الدم
بشكل طبيعي بتفوت جوا خلايا الـ red blood cells،
الـ RBCs، وبتروح وهي رابطة بـ Hemoglobin A1، ومعطية
الـ subforms: Hemoglobin A1a، Hemoglobin A1b، و
Hemoglobin A1c. طيب، هدول الـ subforms الثلاثة، بإيش
بيختلفوا عن بعض؟ بيختلفوا بأن هذا السكر لما اجى
يربط، ربطه، مع الـ hemoglobin، على أي موقع ربط في
الـ hemoglobin، ربط في Beta chain ولا في Alpha
chain؟ في أي أمينو اسيد ربط؟ ما نحن عارفين إن الـ
hemoglobin عبارة عن بروتين، والبروتين عبارة عن
مجموعة من الأحماض الأمينية. فلما ييجي السكر يربط في
الـ hemoglobin، تمام، وين السكر بالضبط ربط؟ ربط في
أي أمينو اسيد مع الـ hemoglobin؟ ربط في أي chain، في
الـ alpha ولا في الـ beta؟ ما نحن عارفين إن الـ
hemoglobin A1 عبارة عن ٤ بوليببتيد chain، سلسلتان
alpha وسلسلتان beta. طيب، اللي بدنا نفهمه إنه أنا
بهمّني الـ subform، الـ Hemoglobin A1c، اللي هو ما
يسمّى بمخزون السكر. هذا المركب كيف بيتكون؟ بيتكون
إنه زي ما أنتم شايفين بالرسمة، لما بيجي جزيء
الجلوكوز ويربط في الـ beta chain، هي مكتوب beta A،
يربط في الـ beta chain، في المنطقة الطرفية في
amino group، يعني في حمض أميني معين، ساعتها بتكون
لما يتحد الجلوكوز ويربط مع Hemoglobin A1، ويربط معه
في الـ beta chain، ساعتها حيعطيني الـ Hemoglobin
A1c، تمام؟ لكن في مركبات ثانية، مثلًا، بيجي السكر بيربط
في الـ hemoglobin، في الـ hemoglobin، بس مش مثلًا في الـ
beta-chain، في الـ alpha-chain، ساعتها بيعطيكي
Hemoglobin A1a و A1b. ما بدنا ندخل بتفاصيل، أهم شيء
بدنا نعرف إن جزيء السكر بفوت جوا الـ RBCs، ويربط في
الـ Hemoglobin A أو ما يسمى بالـ A1. وين بالضبط بيربط؟
في الـ beta chain، في الأحماض الأمينية الموجودة في
الـ beta chain، عشان في الآخر يعطيني الـ Hemoglobin
A1c. تحت كتبت لكم المركبات، ما بدنا نحفظها. تحت كتبت لكم
Hemoglobin A أو A1، ربطه مع الجلوكوز، العملية في
الأول بتكون ربط، بتعطيني مركب الـ Pre Hemoglobin A1c،
بعد هيك العملية بتصير بطيئة، وبتحوّل المركب لـ Pre
Hemoglobin A1c إلى Hemoglobin A1c، وهو المطلوب، الـ
Hemoglobin A1c، موجود جوا الـ RBCs بكميات كبيرة،
أكثر من الـ subforms الأخرى، أكثر من الـ Hemoglobin
A1a والـ Hemoglobin A1b. هدول طريقة ارتباط السكر
بالـ hemoglobin من مواقع أخرى، تمام؟ هذا اللي بدنا
نعرفه.
الـ significance of this test، يعني إيش الهدف من الفحص؟
إيش فائدة هذا الفحص اللي هو hemoglobin A1c، فحص
لو ما كان صائماً على خلاف فحص الـ fasting blood sugar
بتطلب أن تكون صائماً. إذاً، حابة أؤكد على شيء، إنه بشكل
طبيعي، عملية طبيعية تسير في الجسم، تسير بشكل بطيء،
ما بدها أنزيمات وبشكل irreversible، إنه تركيز معين
من السكر في الدم بيروح هو داخل خلايا الـ RBCs
بدنا نتخيل الميكانزم داخل الـ RBCs، فيه ثلاثة هما جلب
أساسيات: Hemoglobin A1، و Hemoglobin A2، و Hemoglobin
F، وقلنا إن Hemoglobin A1 هو نفسه Hemoglobin A. هلجت
لما بيفوت السكر داخل الـ RBCs، جزيئات السكر بتروح
ترتبط مع Hemoglobin A1. لو السكر ارتبط مع
Hemoglobin A1 بالـ Beta Chain تبعته، هيتكون مركب
اسمه الـ Hemoglobin A1C. هذا اللي احنا بنسميه مخزون
السكر، بنسميه Glycated Hemoglobin، Hemoglobin مربوط
بجلوكوز، أو Glycosylated Hemoglobin، نفس المسمى.
Hemoglobin مربوط بالسكر من جهة الـ Beta Chain.
وبرضه تتكون مركبات أخرى: Hemoglobin A1A، و
Hemoglobin A1B. بس هذه كيف بتتكون؟ أن السكر بربط مع
Hemoglobin A1، ولكن مش في الـ Beta Chain، في مثلاً
سلاسل Alpha Chain، تمام؟ بس ما بدنا تفاصيل، وتركيزها
بتكون قليلة، بس الأكثر بتكون الـ Hemoglobin A1C. الـ
Blood Levels of Glycated Hemoglobin Dependence
هالجيت نسبة Hemoglobin A1C، اللي هو الـ Hemoglobin
اللي ارتبط بالسكر، نسبته في الجسم تعتمد على شو؟
تعتمد على شغلتين أساسيتين: الـ Lifespan للـ RBCs،
والـ Blood Glucose Concentration، التركيز في اللي تحت.
وبعدين نطلع باللي فوق. إذن، تركيز ونسبة Hemoglobin
A1C، اللي هو مخزون السكر، يعتمد تركيزه على شغلتين:
على تركيز السكر في الدم، وعلى عمر الـ RBCs. تركيز
السكر في الدم. هل جيت، لو أنا إنسان مثلاً عنده داء السكري،
داء السكري، عنده مرض سكري، يعني السكر عنده في الدم
يا جماعة، بده يكون كثير عالي، عالي كثير، فوق الـ 180
مثلاً، تمام؟ هل جيت؟ كمية السكر اللي هتفوت داخل الـ
RBCs هتكون مهولة أكثر من الطبيعي، متخيلين؟ شخص مريض
سكري، معناه إنه في الـ blood تبعه، في الدم تبعه،
السكر عالي كثير، وبالتالي كمية السكر اللي هتفوت
داخل الـ RBCs هتكون كميتها كبيرة، سكر كثير دخل
الـ RBCs، معناها يرتبط بشكل أكبر مع Hemoglobin A1،
معناها ينتج عندي مركب Hemoglobin A1C بكميات أكبر
من الوضع الطبيعي. وبالتالي، بتخيل مريض السكري لما
أجي أفحص مخزون السكر، اللي هو مركب الـ Hemoglobin
A1C، هلاقي نسبة هذا المركب عالية جداً، صح ولا لأ؟ طيب،
نفهم العكس، أنا إنسان سليم، السكر عندي في الدم طبيعي،
معناه إن كمية السكر اللي هتفوت داخل الـ RBCs هتكون
ضمن الـ range الطبيعية، هتفوت وتدخل.. هتدخل وتفوت
داخل الـ RBCs، وترتبط مع Hemoglobin A1، وتتكون Hemoglobin
A1C، يعني هيتكون هذا المركب الـ Hemoglobin A1C
بتركيز طبيعي، بنسبة طبيعية، على خلاف مريض السكري.
مريض السكري، بيكون عنده مخزون السكر عالي، لأنه أصلاً
تركيزه السكر في الدم عالي، فهيفوت سكر أكثر داخل الـ
RBCs، ويتكون مركب الـ Hemoglobin A1C بكميات
أكبر. إذن، كل ما زاد مستوى السكر في الدم، كل ما زادت
نسبة الـ Hemoglobin A1C، كل ما زاد نسبة تكوينه،
تمام؟ أيضاً، الـ lifespan للـ RBCs، كلنا عارفين إن
عمر خلية الدم الحمراء 3 شهور، 120 يوم، صح ولا مش صح؟
تمام. تخيلوا شخص عنده Hemolytic Anemia، يعني عنده الـ
RBCs اللي بتتكون، بتتكسر طول الوقت، يعني الـ lifespan اللي
لها قصير، الـ RBCs اللي بتطلع في الدم بسرعة بتتكسر، معناه
الكلام، السكر اللي في الدم تبع الإنسان مش هيكون
قادر يفوت داخل خلايا الدم الحمراء، ويربط مع Hemoglobin A1
ويكون Hemoglobin A1C، صح ولا لأ؟ لأن الـ RBCs على
طول بتتكسر، فما فيش فرصة للسكر يفوت جواها، ويدخل بالـ
Hemoglobin، وبالتالي نسبة Hemoglobin A1C هتكون
قليلة، أصلاً مش هيتكون المركب، تمام؟ مش هيتكون
مركب الـ Hemoglobin A1C، لأن خلايا الدم الحمراء
بسرعة بتتكسر. إذن، عمر الـ RBCs برضه بيحدد.. بيحدد
ويلعب دوراً في إنه يحدد تركيز المركب الـ Hemoglobin
A1C. إذن، عمر الـ RBCs وتركيز السكر في الدم، هذول
بيحددوا تركيز Hemoglobin A1C عند الإنسان. الـ
specimen. نبدأ بالعينة، إجاني شخص بده يعمل فحص
Hemoglobin A1C، هيك بيجي في الـ request: Hemoglobin
A1C، يعني مخزون السكر. EDTA is the anticoagulant
of choice for all methods. طبعاً، مخزون السكر
بنعمل يا جماعة بأكثر من طريقة. كل الطرق، نوع العينة
المسموح فيها هي whole blood، لا serum ولا plasma.
بطلنا و ما بدنا نشتغل لا serum ولا plasma. لما بدك
تعمل فحص مخزون السكر، نوع العينة تبعتك whole blood.
تمام؟ ليش؟ أنا بدي الـ Hemoglobin A1C، هذا المركب،
هذا المركب وين موجود؟ وين بتكون؟ داخل الـ RBCs.
إذاً، لازم أن عينتي تكون whole blood، دم، خلايا دم
حمراء، صح ولا لأ؟ عشان آخذها وأكسرها وأطلع منها
الـ Hemoglobin A1C، عشان أجيصه، صح ولا مش صح؟ تمام،
هذا الـ whole blood، بأجمعه في anticoagulant، نوع الـ
anticoagulant المفضل هي الـ EDTA، يعني بتجيبي من
الأنابيب اللي لون الـ cover تبعهم الـ mauve، وبتحطي
whole blood، وبتعملي mix. No special preparation,
fasting specimen are not required، يعني ما في تحضير
للمريض، ما في أي تعليمات للفحص، الصوم مش ضروري، تمام.
معظم الأساليب تحتاج إلى أجهزة مع مجهود.. مجهود.. مجهود..
مجهود.. مجهود.. مجهود.. مجهود.. مجهود.. مجهود.. مجهود..
مجهود.. مجهود.. مجهود.. مجهود.. مجهود.. مجهود.. مجهود.. م
وأنا مين بده يجيص الـ Hemoglobin A1C، مخزون السكر،
اللي موجود داخل الـ RBCs، طبعاً الـ Hemolysing
reagent بيجي من الـ Manufacturer، من الشركة، تمام؟
Typically, whole blood may be stored up to seven
days at 2-8°C. هل جيت، إنت ممكن
تجمعي whole blood من المريض، بتحطيها في أنبوبة
الـ EDTA، وممكن تخزني العينة في الثلاجة لمدة سبعة أيام،
تمام؟ تحفظ في درجة حرارة الثلاجة لمدة سبعة أيام، في
أي جهاز بتشتغلي عليه الفحص. طيب، فقط الـ EDTA المسموح
فيه كـ anticoagulant، لا الـ heparin sample.
يعني، ممكن أستخدم الـ anticoagulant الهيبارين، مش بس
الـ EDTA، بس فيه يعني limitation لاستخدام
الهيبارين: should be assayed within two days and
maybe not suitable for other methods. الـ
Electrophoresis، لو أنت بدك تجمعي الـ whole blood
بالهيبارين، خلال يومين بدك تشتغلي الفحص، يعني ما تخزنّي
العينة في الثلاجة سبعة أيام، فقط يومين. أيضاً، لما أنا
حكيت لكم إن مخزون السكر ممكن أنا أستخدم أكثر من
طريقة عشان أشتغله، صح ولا لأ؟ هل جيت، لو أنا بطريقة
الـ electrophoresis، الفصل بالكهرباء، بدي أحسب نسبة
الـ Hemoglobin A1C، اللي هو مخزون السكر، بيعبر عن
مخزون السكر، ممنوع أجمع عينتي بالهيبارين، ممنوع يعني،
ما بيعطيني نتائج بالمرة، لازم بالـ EDTA، عشان هيك
بنقول لكم الـ EDTA مناسبة لكل الطرق. آخر ملاحظة: الـ
blood glucose level reflects the previous few
hours glycemic state. هالجيت، هنا الـ fasting blood
glucose، الفحص اللي لازم تكوني إنت صائمة ثمان ساعات
قبل ما تعمليه، هذا بيعبر لك، هذا الفحص إنه كم كان سكرك
خلال ساعات سابقة، تمام؟ هل جيت، احنا لما نحكي لك بدنا
تعملّي الـ fasting blood sugar، بتروحي تصومي، تمام،
ساعات، وبتيجي تعملي الفحص. هل جيت، هذا الفحص ما
بيعطيني indication، مؤشر، إنه كيف كان سكرك قبل أشهر،
تمام؟ فقط بيعطيني مؤشر إنه قدّيش كان سكرك قبل
ساعات قليلة، يعني قبل عشر ساعات، قبل اثنتي عشر ساعة،
قدّيش كان سكرك، تمام؟ في عندي حاجة اسمها الـ Glycated
albumin، هذه برضه جديدة عليكم، برضه عملية طبيعية زي
ما السكر بيفوت داخل الـ RBCs، وبربط مع Hemoglobin A1، و
بيكوّن مركب، مخزون السكر، اسمه Hemoglobin A1C، هذه
عملية طبيعية. نفس الشيء، جزيئات من السكر ترتبط
ببروتين اسمه الـ albumin في الدم، وبتكون مركب اسمه
الـ glycated albumin. albumin عبارة عن البروتين،
albumin. glycated albumin، معناه albumin مرتبط
بالجلوكوز. هذا الـ Glycated albumin، في دراسات حديثة
قالوا إنه ممكن ينعمل لمرضى السكري، عشان يتابعوا سكرهم،
وبيعطيك مؤشر إنه كيف كان السكر عند مريض السكري
قبل 14 يوم، يعني قبل أسبوعين. إذاً هذا فحص ممتاز،
بيعطيني monitoring، مراقبة، لمرضى السكري، كيف كان
سكرهم قبل 14 يوم، قبل أسبوعين. إذاً فحص برضه ممتاز.
اقرأوا عنه يا جماعة، يعني ممكن أعطيكم الـ
homework عن الـ glycated albumin. نفس الطريقة، بيجي
السكر في الدم، بيرتبط في الـ albumin، أيضاً موجود في
الدم، وبيعطيني مركب اسمه glycated albumin. نيجي احنا
الطريقة، نيجي نجيص الـ glycated albumin عند مرضى السكري،
تمام؟ أكيد هيطلع عندهم عالي، ليش؟ ليش عالي؟ ما هو
أكيد عالي، لأن سكرهم أصلاً في الدم عالي، فسكر كثير في
الدم، معناه هيجي السكر ويرتبط بكميات كبيرة مع
الألبومين، إذاً المحصلة هيتكون مركب الـ Glycated
albumin بتركيز كبير. أيضاً، Hemoglobin A1C، أنا بستخدمه
لمرضى السكري، هو مؤشر إنه كيف كان السكر عند مريض
السكري قبل ثلاثة شهور سابقة. إذن، يعني لو نيجي
نسألكم سؤال، برضه هذا هيكون من ضمن الـ homework،
مين أفضل أعمل متابعة كل أسبوعين لمرضى السكري،
أشتغل لهم الـ Glycated albumin، ولا أعمل متابعة كل
ثلاثة شهور لمرضى السكري، وأشتغل لهم مخزون السكر الـ
Hemoglobin A1C. إذن، الـ Hemoglobin A1C هو الـ
longest، يعني بيعطيني مؤشر لفترات طويلة، لثلاثة شهور،
الـ Glycated albumin لاسبوعين، الـ fasting blood sugar مش
نافع كثير لساعات معينة، تمام؟
حكيت لكم إنه مخزون السكر، فحص الـ Hemoglobin A1C،
بقدر أشتغله بطرق مختلفة، مثل الـ Electrophoresis،
طريقة الفصل بالكهرباء، الـ Immunoassay، بطرق مناعية،
الفرق اللابالي وكمان بنزيل بقايا الـ RBCs اللي
متكسرة. Hemoglobins are retained by a cation
exchange resin. الـ Hemoglobin هتظل رابطة بالرزن
لأن شحنتها موجبة والرزن سالب. Hemoglobin A1C is
specifically eluted after washing away the
hemoglobin A1A وA1B fractions. بعدين hemoglobin A1C
بعمله اليوشن بفكه عن باقي أنواع الـ hemoglobins
and is quantified. وبعد هيك بقيسه مباشرة على جهاز
الـ spectrophotometer على 415 نانومتر. The
estimation of the relative concentration of
hemoglobin A1C is made by the measurement of the total
hemoglobin concentration by direct photometric
reading at 415 nanometers. هذا الكلام هنفهمه بالـ
procedure. تمام؟
بس أهم شيء التركيز على أنه المبدأ الـ
resin سالب، الـ Hemoglobin كلها موجبة، الـ Hemoglobin
اللي أنا بدي إياه، Hemoglobin A1C، الموجبية تبعته ضعيفة
كيف بفكه عن الـ resin؟ بضيف Reagent بعمل Elution
اللي بفكه، باخده وبروح أقيصه مباشرة على الـ
spectrophotometer. إن شاء الله لما نرجع الجامعة
هنشتغل عملي الـ Hemoglobin A1C، مخزون السكر، الـ
procedure. أول شيء بتروح تجيبي tube بلاستيك و
بتسميها الـ Hemolysate. هالجيت بتاخدي من الـ blood
اللي انجمع بعينة الـ EDTA، بتاخدي منه خمسين
microliter، بتحطيها في الـ tube البلاستيك، وبتحطي
عليها 200 microliter من Reagent واحد. هذا بيكون
موجود في الـ kit. هالجيت Reagent واحد اسمه الـ
Hemolysate Reagent، هيشتغل على الـ blood، ويبدأ يكسر
الـ RBCs ويعمل releasing للـ Hemoglobins ويعطي الـ
Hemoglobins كلها شحنة موجبة، يوحد شحنتها، تمام؟
إذاً هذا الـ Hemolysis preparation. هذه أنبوبة الـ
Hemolysis بعملها mix لما بحط الـ 50 على الـ 200
مايكرون، بعمل mix منيح وبأترك هذه الـ tube مدة عشرة
لخمستاشر دقيقة at room temperature، في درجة حرارة
الغرفة، عشان أضمن إن الـ Hemolysing reagent كسر الـ
RBCs ووحد شحنة الـ Hemoglobins، تمام؟ بعد ما بأترك
هذه الـ tube، بروح أحضر الـ column. كلنا عارفين تحضير
الـ column. أول شيء حكينا بنكسره من تحت عشان يبدأ
ينزل نقطة نقطة. بنكسره من تحت إذا فاكرين، ومن فوق
بنشيل الغطاء تبعه. جواته فيه buffer، حكينا هذا الـ
buffer، الفايدة منه أنه يحمي الـ resin من أي
تغيرات. بعدين بروح أجيب الـ tube وبحطها تحت الـ
column عشان يظل ينزل الـ buffer نقطة نقطة. بعد
ما ينزل الـ buffer كله، أصلا هو بيكون جواته الـ
buffer. بعد ما ينزل الـ buffer نقطة نقطة، حكينا إنه
بتلاحظوا إنه عندي مادة الـ resin اللي بتحمل الشحنة
السالبة بتكون جاية بين طبقتين، أو بين two filter
papers. بيكون في filter paper فوق و filter paper تحت
والـ resin بالنص. حكينا إيش بنعمل، إذا فاكرين، من رأس
الـ tip من فوق، بتجيب الـ pipette وبتحط فيها tip ومن
رأس الـ tip بتنزلي الـ filter paper وبتضغطيها
على الـ resin. بيصير عندي filter paper، resin،
filter paper. هيك الـ column بيصير جاهز. إذا الـ
column preparation، الكلام اللي حكيتلكم إياه بالـ
slides، حكيتلكم إياه فعلياً، إيش بنشتغل إحنا بالعملية.
هيك جاهز الـ column للفصل، تمام؟ هالجيت الـ
column اللي أنا حضرته، بروح أجيب وبجيب الـ plastic
tube، بحط الـ column جوا الـ plastic tube، وهذه الـ
plastic tube سمّوها الوس، سمّوها الفضلة، تمام؟ أول
خطوة، بتروحي تاخدي خمسين microliter من أنبوبة الـ
Hemolysis اللي حضرتها في الـ slide الأولى، من
أنبوبة الـ Hemolysis، بروح آخذ خمسين microliter و
بحطها جوا الـ column، تمام؟ Let the column drain
to waste. إذًا أول خطوة، بجيب plastic tube، بكتب عليها
waste، بدخل فيها الـ column. بروح باخذ خمسين microliter
من الـ Hemolysis. هالجيت على شو بيحتوي؟
بيحتوي على RBCs مكسرة وعلى الـ Hemoglobins كلها.
باخد من الـ Hemolysis خمسين microliter وبحطها فوق
الـ column. بعد ما أحطها، خطوة رقم 2، زي ما أنتم
شايفين في الـ slide، بروح أجيب Reagent 2، بيكون
موجود في الـ kit، عندنا بوتل اسمه Reagent 2، باخد من
هذا الـ Reagent 200 microliter وبحطها برضه فوق في
الـ column، يعني فوق الـ 50 microliter بنحط 200
microliter من Reagent 2 وبخليه ينجط نقطة نقطة لحد ما
ينزل كل الـ Reagent. إيش الفائدة من Reagent 2؟
بيحكي لي بيعمل على إزالة الـ RBCs المتكسرة. مش
حكينا الـ Hemolysate فيه RBC متكسرة وفي
Hemoglobins. أنا ما بدي الـ RBC المتكسرة ترتبط بالرزن
فبعد ما أنا حطيت الـ 50 µL في الـ column اللي هو
الـ Hemolysate، بروح أحط 200 µL من الـ Reagent 2
هدفه إنه يشيل كل الـ waste، الفضلات، ينزلها، بما فيها
الـ RBCs المتكسرة. وبعد ما ينزل الـ 200 نقطة نقطة،
برضه بروح، خطوة ثلاثة، أضيف من Reagent 2، 2 mL، يعني
2000 microliter، كمان بحطها فوق الـ column وبخليه
يظل ينزل نقطة نقطة. برضه الهدف من Reagent 2، أكد إنه
تم إزالة كل الـ waste، الفضلات، وكل الـ RBCs
المتكسرّة، نزلت وبطلت عالقة في الـ resin، فقط اللي
رابط في الـ resin هي أنواع الـ Hemoglobins، تمام؟
هيك تيوب الـ waste، بتاخديها وبتروميها، discard،
نرميها، لأن كلها waste، فضلات، RBCs متكسرة. هالجيت
بتاخد الـ column، أصبح فيه في الـ column الـ resin
حامل فقط الـ Hemoglobins. بتروح تجيب تيوب نظيفة،
plastic tube نظيفة وبتكتبي عليها Hemoglobin A1C،
الشغل اللي أنا بدي أجيبها، وبحط الـ column فوق الـ
plastic tube. رقم أربعة، بروح أضيف أربعة mL، يعني أربعة
آلاف microliter من Reagent رقم ثلاثة. Reagent رقم
ثلاثة هيعمل elution، يعني هالجيت صارت كل الـ
Hemoglobins موجودة في الـ resin. أنا بدي Hemoglobin
A1C. لما بضيف Reagent 3 على الـ column، Reagent 3
هيفك الـ Hemoglobin A1C عن الـ resin وينزل Hemoglobin
A1C في الـ plastic tube. اللي نزل، تاخديه وبتروحي
على الـ spectrophotometer، بتصفّيها بـ distilled water،
بعدين بتحطي المحلول اللي نزل في
الـ cuvette وبتقراي absorbance على الـ spectrophotometer على
415 نانومتر. إذاً هيك إحنا صار عندنا الـ absorbance
لهيموجلوبين A1C. بيحكي لي الفحص بيضل stable على الأقل
ساعة كاملة، يعني خلال ساعة من وقت ما تعمل الفحص معك
ساعة، إنك تعمل الفحص، النتائج بتضلها ثابتة. بعدين في
شغل لازم نعملها، عملناها في Hemoglobin A2، أذكركم
بروح أجيب plastic tube نظيفة وبكتب عليها Total
Hemoglobins. بدنا نفحص، أو بدنا نشوف، نجيب الـ
absorbance للـ Total Hemoglobins كلها اللي موجودة
جوات الـ RBCs. فبنروح نجيب plastic tube وبنسميها
Total Hemoglobins. هذه الـ tube، إيش بنحط فيها؟ بنحط
فيها 6 mL من الـ Reagent 3 و 25 microliter من الـ
Hemolysate. الـ Hemolysate اللي حضرناه في أول مرة
في الـ slide الأولى. الـ Hemolysate اللي بيحتوي على
الـ Hemoglobins كلها والـ RBCs اللي اتكسرت. طبعاً
أنتوا هنا حاطط لكم 12 mL و 50 microliter، كميات كبيرة
فعلياً لما نيجي نشتغل عملي، هناخد نص الكمية، 6 mL و 25
microliter، برضه بنصفّيها بـ distilled water. وهذا الـ
mix، الـ 6 mL والـ 25 microliter، بتاخديه وبتصفّيه بـ
الـ distilled water وبرضه بتقرأ absorbance، بتحطيه في الـ
cuvette وبتقرأ absorbance على 415 نانومتر. إذاً هيك أنت
بتجيب الـ absorbance لمن؟ للـ total hemoglobins
لأن هذه الخطوة هتفيدنا في القانون لما بدي أجي أحسب
نسبة مخزون السكر. لازم يكون عندنا الـ total
Hemoglobin، الـ absorbance للـ Total Hemoglobin
عشان نشوف الـ calculations، الحسابات.
الـ Hemoglobin A1C بتم التعبير عنه بنسبة مئوية. هيك
الـ range تبعه مش بـ concentration، مش بتركيز، إنما
بنسبة مئوية. النسبة المئوية لهيموجلوبين A1C تساوي
هيك القانون. الـ absorbance لهيموجلوبين A1C جِبناه
ولا ما جبناه؟ جبناه. ضرب الـ volume لـ Hemoglobin
A1C، يقصد أي volume؟ يقصد حجم الـ Reagent اللي
استخدم عشان يعمل elution لـ Hemoglobin A1C. لو
رجعتوا للـ slide اللي قبلها، شوفوا أنا ضفت من
Reagent ثلاثة عشان يفك الـ Hemoglobin A1C، ضفت 4 mL.
إذاً لما يحكي لي حجم الـ volume تبع Hemoglobin A1C،
يقصد حجم الـ Reagent، الكمية تبع الـ Reagent اللي
أنا ضفتها عشان يعملي elution لـ Hemoglobin A1C.
يعني ضرب 4. الـ absorbance اللي جبته من الجهاز لـ
Hemoglobin A1C، ضرب 4، على الـ absorbance للـ Total
Hemoglobin. هذه الـ tube اللي إحنا قرأناها على الـ
spectrophotometer وحضرناها في الـ slide فوق، إذاً
انتبهتوا، 6 mL مع 25 microliter وقرأناها على الجهاز،
ضرب الـ volume لـ Total Hemoglobin، برضه كمية الـ
Reagent اللي أنا ضفتها على الـ Hemolysate، جِدْسه
ضفت 6 mL، صح ولا لأ؟ يعني ضرب 6 الـ absorbance لـ
Total Hemoglobin، ضرب 6. كل هذا ضرب 100%، بيطلع عندي
مخزون السكر. يا جماعة، بدي أحكيلكم هذه طريقة الـ
cation exchange chromatography، طريقة manual، على ما
أعتقد ما ضلّ حدا بيستخدمها، يعني قليل المختبرات ممكن
نلاقيها موجودة، بس هي الأصل. هالجيت أصبح فينا أجهزة
أنتِ ما عليكي فقط غير تاخدي عينة الـ blood
اللي جمعتيها في الـ EDTA، وتحطيها في جهاز، وخلال
دقائق الجهاز بيطلع جديش نسبة مخزون السكر عند هذا
المريض، تمام؟ إذاً أصبح اليوم في المستشفيات وفي
المختبرات نظام جهاز بيطلع مخزون السكر على السريع من
غير هذا الشغل اللي إحنا بنشتغله، شغل الـ manual،
تمام؟ الـ reference range، «Glycated Hemoglobin» أو
«Hemoglobin A1C» is expressed as a percentage.
حكينا إن مخزون السكر نتيجته بنطلعها بالنّسبة
المئوية. الإنسان الطبيعي اللي ما عنده سكري لازم
يطلع مخزون السكر عنده أقل من 6.4%. أما إنسان مريض
سكري، يعني «