السلام عليكم ورحمة الله وبركاته يعطيكم العافية
جميعا ان شاء الله اليوم موضوعنا بعنوان Total
Proteins and Albumin Analysisحنحكي عن الـ
introduction «Proteins are polymers of amino acids
produced by living cells in all forms of life»
بيحكيلي إنه البروتينات تركبتها بوليمر من الأحماض
الأمينية يعني تركيبة لبروتين سلسلة من الـ amino
acid المرتبطة مع بعضها البعض بواسطة الـ peptide
bond الرابطة الببتديةالبروتينات بيحكي لـ Produced
by living cells بتم تصنيحها من خلال الخلايا الحية
The key rules which plasma proteins play in bodily
function together with the relative easy of
assaying them makes their determination a viable
diagnostic tool as well as a way to monitor
clinical progress بقوللي إنه بما إنهالبروتينات
الموجودة في بلازمة الدم تلعب دور مهم في الـbody
function يعني إلها وظائف جوّات الجسم وأيضا من
السهولة أن نحسب أن نحسب تركيز الـtotal protein في
هذه البلازمة في الدمهذا أدى كله إلى جعل فحص الـ
Total Protein Test فحص Available له قيمة مهم جدا
إنه نعمله كأداة تشخيصية لمراقبة ومتابعة الحالات
السريرية
نكمل بالـ introduction in very general terms
variations in plasma protein concentrations can be
due to any of the three changes بيحكيلي يعني جبل
ما نبدأ بهذه الجملة الـ concentration الطبيعي للـ
total protein أنا عندي فحص اسمه total protein test
فالـ Total Protein اللي موجودة في البلازمة تاعتنا
تركيزها تقريبا من 6.6 لـ 8.4 جرام per deciliter
الوحدة بالجرام per deciliter إذا من 6 لـ 8 جرام
per deciliter تركيز كل البروتينات في بلازمة الدم
هذا ممكن التركيز يصير فيه fluctuation يعني مرة
يزيد مرة يجل طبعا بيزيد و بيجل يعني هذه حالات
مرضية الإنسان الطبيعي بدي يكون ال range ضمن
التركيز ضمن ال normal range أما يزيد و يجل معناه
عنا مشكلةفهنا بيحكيلي الـ Variations، الاختلاف في
تركيز الـ Total Protein في الـ Plasma ناشئ عن سبب
من الأسباب القاتلة إما يكون عندي مشكلة في معدل
تصنيع البروتينات خلل في معدل التصنيعأو عندي خلل في
معدل التخلص من البروتينات في الجسم the rate of
removal أو ممكن يكون عندي مشكلة في volume of
distributionفي توزيع هادي لبروتينات موجودة في
البلازما أخر جزئية بدنا نفهم كيف الست الحامل الـ
Pregnant Woman عندها two circulation الـ blood
تبعها عندها two circulation الـ circulation تبعها
الدورة الدموية تاعتها و تاعت الطفل تمام؟ و تاعت
الجنينمعنى الكلام هيكون عند الست الحامل بلازمة
أكتر من الوضع الطبيعي يعني الـ Volume of بلازمة
عند الست الحامل هيكون أكتر من الطبيعي حجم البلازمة
ذات لما يزيد حجم البلازمة معناه الـ Total Protein
اللي موجودة جوات البلازمة هتتخفف، تمام؟ إنسان
طبيعي عنده البلازمة حجمها طبيعيوبالتالي الـ Total
Protein هتكون طبيعية جوا البلازمة أما الست الحامن
حجم البلازمة عندها زادت بسبب وجود Two-circulation
الـ circulation الخاصة فيها أو الخاصة بالجنين أدى
إلى تخفيف تركيز الـ Total Protein اللي موجودة في
البلازمة إذاً هدول تلت شغلات عملوا تغيير في تركيز
الـ Total Proteinproteins common properties بدنا
نحكي عن بعض خصائص البروتينات in spite of
functional differences between the various ceramic
proteinsThey have certain common biophysical and
biochemical properties these include على الرغم من
أن البروتينات مختلفة عن بعضها البعض من حيث الـ
function من حيث الوظيفة إلا إن في هناك خصائص كيمية
وفيزيائية كل بروتينات تشترك فيها، تمام؟يعني بتلاقي
بروتين وبروتين بيكون لهم نفس الخصائص الكيميائية
والفيزيائية لكن إيه بيختلفوا في الوظيفة من أشهر
هذه الخصائص اللي هنستعرضها مع بعض هي خصائص يعني
تنتبق على كل بروتينات بغض النظر عن وظيفة هذا
لبروتين أول خاصية A basic composition of carbon,
hydrogen, nitrogen and oxygenكلنا عارفين إن
البروتين عبارة عن أحماض أمينية مرتبطة مع بعض غالب
بعض بـpeptide bond صح ولا لأ؟ هلجيت الأحماض
الأمينية الـ amino acid شو تركيب الأحماض الأمينية؟
الأحماض الأمينية تتركب من أربع عناصر أساسية داخلة
في تركيب الأحماض الأمينية Carbon، Hydrogen،
Nitrogen، Oxygenإذاً كل بروتينات فيها أحماض أمينية
وتركيبة الأحماض الأمينية عبارة عن أربع ناصر
Hydrogen, Carbon, Nitrogen and Oxygenتمام الخاصية
التانية «Pig bone of covalent-peptide bond which
joined amino acid units together» حكيناها إن كل
بروتينات عبارة عن سلسلة من الأحماض الأمينية مرتبطة
مع بعضها البعض بـpeptide bondتالت خاصية Absorption
Maximum in the Ultraviolet Region كل بروتينات
بيصيرلها أعلى انتصاص بتنتص الضوء المسلط عليها في
منطقة الـ UV المنطقة الفوق بنفسها Ultraviolet من
280 لـ 340 نانومتر كل بروتينات بيصيرلها انتصاص في
هذه المنطقة
بنكمل مع بعض proteins common properties based on
these properties laboratory methods have been
developed to determine the concentration of
proteins in serum often with the assumption that
بناء واعتماد على خصائص البروتينات كلها الخصائص
الاستعرضناها قبل شوية تم تطوير طرق مخبرية مختلفة
من خلال هذه الطرق سيتم حساب تركيز الـ Total
Protein في الـ Plasma الدمتحت فيه عبارة، each of
the several hundred individual proteins present in
serum reacts similar in chemical reaction يا جماعة
السيرم أو البلازمة تحت الدم فيها مئات من
البروتينات يعني أنواع مختلفة من البروتينات hundred
proteins هذه البروتيناتتفاعلاتها كلها Similar،
بتكون متشابهة الـ Chemical reaction بتاعتها،
التفاعلات الكيميائية بتاعتها كلها بتكون متشابهة و
هي نفسها، تمام؟ لأن أصلا الحكينا لبروتينات يعني
إلها خصائص فيزيائية و كيميائية مشتركة لكن بتختلف
في وظائفها، كل بروتين بيقدّي وظيفة مختلفةفحصنا
اليوم اسمه Serum Total Protein Test سواء حكيت
Serum Total Protein Test أو Plasma Total Protein
Test أو Total Protein Test هذه أسماء مختلفة للفحص
احنا عادة بنحكي Total Protein Test عالسريع لأنه
انا بدي احسبتركيز كل بروتينات الموجودة في بلازمة
الدم هذا الفحص is a biochemical test فحص كيميائي
بيقيص الـ total amount of protein in blood plasma
or serum هذا فحص كيميائي بيقيص تركيز كل بروتينات
الموجودة سواء في بلازمة الدم أو في الـ serum تبع
الدم تمام؟Total Protein Test Can Reflect يعني ليش
يعني هنا بنطرح سؤال ليش الدكتور بطلب فحص الـ Total
Protein Test؟ ليش بديعرف تركيز الـ Total Protein
في الـ Plasma قدّام؟ لتلت أسباب، عشان نشيك على الـ
Nutritional Status حالة التخزين عند المريضحكينا
إنه البروتينات إلها مصدرين إن خلايا جوات الجسم
وبالأخص الـ liver خلايا الكبد هي المسؤولة عن تصنيع
البروتينات إذا البروتينات مصدره داخلي الخلايا هي
اللي بتصنعه وإنه مصدر آخر البروتين إنه إحنا بنحصل
عليه من الـ diet من الأكلات مثلا من اللثوم صح ولا
لأ؟اللحوم مليانة بروتينات مثلًا شخص ما بياكل لحمة
جينا يعني أي إشي البقليات اللحوم اللي فيها
بروتينات ما بياكلها بالمرة جينا فحصنا له الـ total
protein لجناه واطي كتير طيب هل واطي لإنه عنده
مشكلة في الكبد مثلًا إنه ما بيصنع البروتينات أو
لإنه عنده سوء التغذية malnutrition يعني عنده سوء
التغذيةإذا أنا من خلال فحص الـ Total Protein بقدر
أعرف هذا الشخص عنده سوق تغذية ولا غزاقه تمام تاني
شغلة بشيك على ال kidney disease بشيك على الكلة
كلنا عارفين أن البروتين زيه زي الجلوكوز أخدته في
السوائل عنصر مهم للجسمممنوع يطلع عن طريق الكيلة مع
الـ urine يجب إعادة انتصاصه يعني الكيلة بدها تعمل
للبروتينات reabsorption وترجعها على الدم طيب لو
البروتين لجته في الـ urine في الـ strip الـ urine
لجت في بروتينمعناه في عندي مشكلة في الـ kidney إذا
فحص الـ total protein يشيك على الـ kidney أيضا
يشيك على liver disease لأنه أصلا من المصنع اللي في
الجسم بيصنع البروتينات حكينا إنه ال liver فأنا
بشيك على الكبد من خلال أني أعمل فحص الـ total
protein
البروتين في البلازمة مصممة من ألبومين و Globulins
عندي قاعدة، عندي معادلة كلنا بدنا نعرفها إن الـ
Total Protein في البلازمة إيش بتساوي؟ بتساوي
الألبومين ذائد ال Globulinحكينا إن الـ albumin نوع
من أنواع البروتينات موجود في بلازمة الدم وموجود
بأعلى تركيز يعني هو المسيطر في البلازمة يعني نص
البروتينات اللي موجودة في بلازمة الدم عبارة عن
albumin فالـ total protein بساوي ال albumin ذات
الglobulin إذا النص الـ total protein اللي في
البلازمة عبارة عن albuminوالنُص التاني عبارة عن
الـ Globulins البروتينات هي Iglobulin الـ Globulin
برضه هذا البروتين فيه منه fraction فيه منه أنواع
الـ Alpha 1 Globulin الـ Alpha 2 Globulin الـ Beta
Globulin والـ Gamma Globulin إذا نفهم من أول نقطة
إن الـ Total Protein بتساوي الـAlbumin زائد
الـGlobulin الـAlbumin بشكل نص الـTotal Protein
الـGlobulin عبارة عن أربع fraction بضم الـAlpha 1
والـAlpha 2 والـBeta والـGamma Globulins تمام؟ هذه
الـFractions هذه الأقسام الـAlbumin وأنواع
الـGlobulinsCan be quantitated using a protein
electrophoresis يعني انا ممكن اعرف تركيز ال album
تركيز Alpha 1 Alpha 2 و Beta و Gamma من خلال ال
Electrophoresis وهذا سيأخذه سنة رابعة الفصل
التانيةنفصلهم على الـ cellulose acetate أو على
الجل ونشوف الباندات الخامسة الألبومين الألف وان
الألف اتو البيتا الجامعة يعني أنا بحسب في الآخر
تركيزهمBut the total protein test أما الفحص
الكيمياء البسيط اللي هو الـ Total Protein is
faster and cheaper أسرع من الـ Electrophoresis
أكيد يعني خلال عشر دقائق بتكون مخلصة الفحص and
cheaper وأرخص أكيد ال Electrophoresis غاليthat
estimates هذا الفحص يقدر لنا الـ total of all
fractions together بيقدر لنا جداش تركيز كل
البروتينات الموجودة في البلازمة يعني جداش تركيز
الألبوم اللي مع Alpha 1 و Alpha 2 و Beta و Gamma
كلهم مع بعض جداش تركيزهم
الطريقة التقليدية لقياس تركيز كل بروتينات في
البلازمة اسمها الـPyrite method طريقة الـPyrite
لكن في طرق كيمية أخرى هنستعرضها مع بعضMethods of
Total Protein Analysis طرق مختلفة من أجل حساب الـ
Total Protein في بلازمة الدم أول طريقة هي الـ Kill
-dial method هذه طريقة reference method طريقة
مرجعية إلا أنها لا تستخدم كثيرا لأنها تحتاج
متطلبات خاصةطريقة quantitative يعني بتعطيك تركيز
الـ Total Protein بدقة هذه الطريقة ما بتجيس الـ
Total Protein الموجود في بلازمة الدم بشكل Direct
بشكل Direct، ما بتقيصه إنما بتقيس الـ Total
Protein بشكل indirect، بشكل غير مباشر طيب، هي إيش
بتجيس بالظبط؟ بتجيس تركيز الـ Nitrogen اللي داخل
في تركيب الـ Amino Acidاللي أصلاً داخل في تركيب
البروتين نفسهمش حاكينا الـ Amino Acid تركيبته
الأساسية Nitrogen و Oxygen و Carbon و Hydrogen
فهذه طريقة الـ Keldal بتقيس تركيز الـ Nitrogen
الداخل في تركيب الـ Amino Acid وتركيز الـ Nitrogen
يعبر عن تركيز الـ Total Protein فقط، هيها بكل
بساطة طبعاً مش هطلبكوا بأي تفصيل يعني اللي حكيته
هذا فقط للعلمأكيد الدكتور مازين هيعطيكوا إياها
بالتفصيل، تمام؟ الـ Ultraviolet Absorption إذا
الكل دا كانت بلكوا Quantitative بروتين نيتروجين
Determination يعني بقيس تركيز النيتروجين الداخل في
تركيب الأحماض الأمينية اللي موجودة في تركيب
البروتين نفسه Ultraviolet Absorption هذه برضه
بيكون عندى كت خاص للـ Total Proteinوهذا الـ Kit
مصمم إن الـ Total Protein يتم قراءتها على الـ
Ultraviolet على المنطقة الفوق بنفس جهة وكتبلكوا
الـ Absorption بيكون على 210 نانومتر وبرضه طريقة
quantitative إلها طبعا يا بنات خطوات و procedure
في ال Kit بيكون في الورقة اللي مع ال Kitطريقة
تالتة Refractometry بشكل مبسط طريقة quantitative
برضه بتعطيك التركيز دقيق هذا عبارة عن
Refractometry عبارة عن جهاز أنت بتحط فيه عينة الـ
Serum أو البلازمة طبعاً البلازمة أو الـ Serum فيها
الـ Total Proteins كلها تحطيها جوات الجهاز الجهاز
هذا بيروح يسلط ضوء أو شعاع على الـ Serum على
العينةجدّاش في عندك Total Protein جوات البلازمة أو
الـ Serum هذه البروتينات أول ما يصلها الضوء هتعمل
تشتت لهذا الضوء، هينكسر الضوء، تمام؟ وفي ديتكتور
في هذا الجهاز بقيس زاوية الانكساركل ما كانت مقدار
زاوية الانكسار عالية كتير وكبيرة هذا مؤشر إن الـ
Total Protein اللي موجودة في البلازما تركيزها عالي
فكسرت الضوء اللي مصلط عليها بشكل أكبر وبشكل أكتر،
تمام؟ هذا بكل بساطة اللي بدنا نعرفهوبرضه مش
مطالبين هنا في العمل بس في النظر أكيد مطالبين فيه
طريقتنا المطالبين نعرف عنها هي الطريقة الرابعة الـ
Pyrite Method هناخدها بالسلايدات الجاية طريقة
quantitative والانتصاص للـ total protein بيكون على
540 نانومتر طريقة الـ dye binding طريقة بسيطة جدا
طبعاً الـ Serum بيكون فيه الـ Total بروتين اللي
بدي أجيسها و الـ Reagent بيكون فيه dye بيكون فيه
سبغة هذه السبغة تربط مع كل بروتينات و بيعطوني
Complex ملون و بيتم قياس هذا ال Complex الملونالـ
Total Nitrogen هذه طريقة بتم فيها قياس تركيز الـ
Nitrogen اللي داخل في تركيب البروتين وقياس تركيز
الـ Nitrogen اللي داخل في مركبات أخرى غير البروتين
بدنا نفهم شغلة ان الـ nitrogen مش بس بيدخل في
تركيب لبروتينات لأ بيدخل فيه مركبات أخرى فهذه
الطريقة تعطي الـ total nitrogen من اسمها total
nitrogenيعني بتقيف الـ Nitrogen اللي داخل في تركيب
البروتينات وبتقيف الـ Nitrogen اللي داخل في تركيب
مركبات أخرى وبحسبة معينة بتم حساب الـ Total
البروتين هذه طرق يعني كتيرة، إحنا الشائع عندنا هي
الـPiuret Method طبعاً
كتاتنا اللي موجودة في مختبرنا بتشتغل بطريقة
الـPiuret Methodحتى اسم الـ Reagent اللي بيجي مع
الـ Kit اسمه «Pyrite Reagent» تمام؟ إذا أنا بعرف
Pyrite Reagent هذا الـ Reagent خاص لقياس تركيز الـ
Total بروتين هذا الـ Reagent يا جماعة بتكون من تلت
مركبات أساسية الـ Sodium Hydroxide الـ Copperالـ
Copper Sulfate و الـ Potassium Sodium Tertarate
إذن تلت مركبات أساسية داخلة في تركيب الـ Pyrite
Reagent هذا الـ Reagent بيجيني من الشركة لونه أزرق
لونه blue color تمام؟هلجيت لما أخلط هذا الـ
Reagent أضيفه على الـ Serum تبع المريض اللي جواته
بروتينات حيصير فيه تفاعل بين البروتينات الموجودة
في ال patient serum و بين الـ Reagent اللي لونه
أزرق ومحصلة التفاعل هيتغير اللون من أزرق إلى
violet إلى اللون البنفسجي a blue reagent which
turns violet in the presence of a proteinلأن الـ
Serum جواته بروتين فلمّا تخلط الـ Serum مع الـ
Reagent بتحول اللون من اللون الأزرق لللون الـ
Violet، البنفسجي، تمام؟ الـ Moveالـ Sodium
Hydroxide لا يتفاعل بالتفاعل على الإطلاق، لكنه فقط
هناك لإعطاء مواقع ألكولين لإنطلاق التفاعل الفايدة
من مادة الـ Sodium Hydroxide الداخلة في تركيب الـ
Pyrite Reagent فقط توفير مواقع ألكولين تمام؟ توفير
بيئة قاعدية للـ Reagentprincipal pyrite method
مبدأ طريقة الـ pyrite بشكل مبسط قبل ما نقرأ الـ
slide بدي أحكيلكم و ألخص المبدأ هل جيت الـ Serum
إيش فيه؟ فيه الـ total proteins كل البروتينات اللي
بدي أحسب تركيزهاهلجيت لبروتينات تركيبها شوية يا
جماعة حكينا مجموعة وسلسلة من الـ Amino Acid من
الأحماض الأمينية المرتبطة مع بعضها البعض بواسطة
روابط بيبتيدية هلجيت لما أنت تجيب الـ Priority
Agent الـ Reagent اللي جاي من الشركة و تديريه على
الـ Serum تحطيه فوق الـ Serum تمام؟ إيش اللي هيصير
بالظبط؟ كيف الـ Reaction بيصير؟هلجيت؟ اتفجنا إن
الـ Sodium Hydroxide اللي في الـ Reagent بيوفر
بيئة قاعدية للـ Reagent، okayطيب، الـ Copper
Sulphate إيش وظيفته؟ الـ Copper Sulphate بيجي على
البروتينات بيجي وين فيه بيبتايد بوند، الـ Copper
Sulphate بعمل reaction مع الـ peptide bond اللي
بتربط الأحماض الأمينية مع بعضها البعض بيجي الـ
Copper Sulphate وين فيه بيبتايد bond بربطوهناك في
هذه المنطقة الـ Copper Sulphate، الـ Copper نفسه،
الـ CuIplus2، بيصيرله reduction، النحاس بيصيرله
اختزان، وبيتحول من CuIplus2 إلى CuIplus1، وهنا
بيبدأ اللون يتغير، إذًا لما بنحط الـ Reagent، الـ
Pyrite Reagent، على عينة السيرم اللي فيها
البروتينات،الـ Sodium Hydroxide يوثّر بيه قاعدية
هيك الـ reaction بدّه، بدّه alkaline medium تمام
الـ Copper Sulphate بيروح على وين فيه بالـ Tight
bond روابط بالـ T دي، راطة بين أحماض أمينية بيجوا
بربط و بتفاعل معهاوهناك في هذه المنطقة بتحول الـ
Cu Plus 2 النحاس Plus 2 إلى Cu Plus 1 يعني بيصير
عندنا reduction اختزال أول ما بيصير اختزال في
النحاس بتغير لون التفاعل من اللون الأزرق مااحنا
اتفجنا الـ Reagent لونه أزرق إلى اللون الـ Violet
إذا لما أشوف اللون البنفسجي بحكي آه والله فيه
بروتيناتموجودة في الـ Serum وراحت واتفاعلت مع الـ
Reagent وأعطت اللون البنفسجي، تمام؟ هالجيت
هتسألوني المادة التالتة في الـ Reagent شو عظفتها،
اللي اسمها بوتاسيوم، سوديوم، ترتاريت، هذه المادة
تشتغل كـ Stabilizer لـ Violet Color، بتثبت اللون
البنفسجي، يعني هالجيت لما صار في reaction، تفاعل،
بين الـ Reagent والـ Serum نتج لون عشان هذا اللون
مايروح بسرعة في إن مادة في الـ Reagent اسمها
Botassium Sodium Tertarate تعمل Stabilizer للمادة
بتثبت للمادة وبتخليها لمدة ساعة، تمام؟ عشان انت
خلال هذه الساعة تقدر تجيثي التفاعل
ع جهاز الـ Spectrophotometer، تمام؟نقرأ السلايدات
ببتايت بوند أوفي بروتيين تتعامل مع ترترات
كومبليكست كابريك ايون ان ألكالين سوليوشن لتصميم
نوع من البرودكت اللي برنسبل زي ما أنا حكيتلكوا
بيها بالظبط أن وين فيه ببتايت بوند بيجي
الكابرسالفيت بربط فيها بعطيني لهم بنفس تجه مين
بيعمله الـ Stabilizer الترتراتإن a positive test
في الفحص الـ Positive copper plus 2 ion is reduced
to copper 1 حكيتلكوا بصير اختزال which forms a
complex with the nitrogens and carbons of the
peptide bond in alkaline solution شغلات حكيها مش
كتير واضحة بس المبدأ نفس ما أنا حكيتلكوا معاها
تمام؟ a violet color indicates the presence of a
protein اللون اللي بنفسه يعني حد استفاعله فيه
بروتيناتThe intensity of color هلجيه اللون
البنفسجي اللي ظهر شدة اللون تتناسب تناسب طرده مع
تركيز الـ total protein اللي موجود في البلازما
بيصيرله طبعًا absorption انتصاف على 546 أو ما بين
الـ520 و570 بتناسب تناسب ترضي معه الـprotein
concentration يعني لما يكون اللون الناتج عن
التفاعل move غامج معناه أنا لحالي بحكي والله
هالجات حيطلع الـtotal protein عاليلما يكون move
طبيعي بحكي والله الـ total protein عند هذا ال
patient طبيعي بس هحكيلكوا شغلة الألوان مش دايما
بتكون صحيحة أحيانا تخدعني تمام فالأفضل القياس على
الجهاز مش بناء على اللون أقرر جدش ال total protein
مابنفع هذا الكلام بس هذه قاعدة أن شدة اللون تتناسب
تناسب ترضي مع تركيز ال total protein اللي موجود في
العينةهنا بالرسمة مش ضروري أعرف تركيبة المُركّب
والأحماض الأمنية لأ بس بدكوا تعرفوا إن هاي
كاتبلكوا peptide bond وين فيه peptide bond بيجي
الكبرثالفات بربط معاها و بيصير له reduction النحاس
و بتحول اللون من أزرج ل موف لبنفسجي بس هذا اللي
بدنا نعرفه من الرسمة مش مطلوب يعني منها نعرف
الرسمة أو نعرف تركيبة المكوناتهالجيل بدنا نحكي عن
الـ specimen نوع العينة يعني لو إجاني مريض وبدي
أفحصله الـ total protein concentration تركيز الـ
total protein في البلازمة تبعته العينة سيرام أو
بلازمة مسموح فيها سيرام and بلازمة may be used
تمام and all usually yield comparable resultsطبعاً
النتائج سواء انت سحبت بلازما من المريض أو سحبت
سيرم من المريض هيعطوك نفس النتائج مافي فرق يا
بتسحب سيرم يا بلازماطب ليش فيش فرق؟ because of the
presence of fibrinogen البلازما levels for total
iprotin are 2 ل 4 gram per liter higher than serum
levels إذا بدنا نتفج العينة يا سيرم يا بلازمة طيب
لو سألناكم سؤال شو الفرق بين السيرم و البلازمة؟الـ
Serum فيها بروتينات و البلازمة فيها برضه نفس
البروتينات بس أن البلازمة بتتميز أن فيها بروتين مش
موجود في الـ Serum مين هو الـ Fibrinogen إذا
البلازمة فيها Fibrinogenأما السيرم مافيه
Fibrinogen والتانين فيهم كل أنواع البروتينات بس
الإختلاف في الـ Fibrinogen عشان هيك بحكيلك مستوى
أو تركيز الـ Total Protein في البلازمة بيكون أعلى
من تركيز الـ Total Protein في السيرم بقيمة 2 ل 4
جرام per liter وهذه القيمة كتير كتير صغيرةحكينا
احنا تركيز لبروتينات بنقيصه بالـ gram per
deciliter طب هنا كتب اللي gram per liter عشان احول
من gram per liter ل gram per deciliter باكسم على
عشرة يعني اتنين تكسم عشرة واربعة تكسم عشرة ايش
بتطلع؟point 2 لـ point 4 gram per deciliter يعني
القيمة قليلة جدا جدا إذن البلازمة والسيرام العينة
مسموح فيها سواء بلازمة أو سيرام معلومة بيقول إن
الـ total protein اللي موجودة في البلازمة أعلى من
الـ total protein اللي موجودة في السيرام بنسبة 2 ل
4 gram per liter ونسبة قليلة جدا لأن البلازمة فيها
فيبرنوجين زود التركيزلكن الـ Serum ما فيه
Fibrination
عشان عملك فحص الـ total protein بس دايما أي فحص
الإنسان بده مقبل إنه يعمله الأفضل الـ desirable
المفضل عندنا تكون صايم okay هو مش إجباري زي فحص
السكر بس الأفضل إنك تكون صايم عشانالأكلات اللي انت
تاكله خلال اليوم ممكن يخلّي عينتك ليبمك تحسها هيك
لونها زي لون الحليب بيكون فيها دهون من الأكل اللي
انت ماكله وبنخاف يصير فيه تأثير على الفحص الـ
Total Protein is stable in serum and plasma هلجيت
عينة الـ Serum و البلازما ممكن أحفظهم تلت أيام في
التلاجة أو ممكن ست شهور في الـ freezer على سالب
عشرينالبروسيجر تبعت الفحص لما نرجع الجامعة ان شاء
الله هنشتغل فحص الـ Total Protein Test يا بنسحب
منكوا سيرام يا بنسحب منكوا بلازمة و بنشوف قداش
تركيز الـ Total Protein عندكوا أول شغلة بتروح
تجيبي تلت أنابيب بلاستيك تيوبتمام؟ بتعملي عليهم
label أول تيوبة بتكتب عليها blank و تاني تيوب
بتكتب عليها standard و تالت تيوب بتكتب عليها ال
patient sample اللي هو ال patient serum أو ال
plasma بعدين بتروح تجيب ال priority agent وعلى
التلت أنبيب بتحطي ألف ألف ألف microliter كل أنبوبة
بنحط فيها ألف من ال reagentبعدين بتروح تجيبي علبة
الـ Standard علبة الـ Standard بتكون يا جماعة جاية
مع الـ Kit هذا الـ Standard فيه مادة واحدة فقط فيه
لبروتينات اللي في الـ Serum تبعنا جوات الـ Totally
Proteins وبيكون الـ Concentration للـ Standard
برضه معلوم يعني تركيز الـ Totally Protein اللي
موجود في الـ Standard بيكون معلومكيف بقى عرفوا
بيكون مكتوب على علبة الـ Standard جدّاش التركيز
تبع الـ Standard، تمام؟ تاخد من الـ Standard 20
مايكرون وبتضيفيها فوق الـ 1000 مايكرون اللي موجودة
في تيوب الـ Standard وبتعمل ميكس منيحتيجي على الـ
Sample بتجيبي الـ Patient Serum أو الـ Patient
Plasma وبتاخدي برضه 20 مايكرون وبتحطيها على الـ
Reagent في انبوب الـ Sample وبتعملي Mix، تمام؟
تعملي mix منيح وincubation عشرة minutes at room
temperature تترك الأنابيب عشر دقائق على درجة حرارة
الغرفة بعد هيك بتروحي على جهاز لـ
Spectrophotometer بتثبت ال wavelength على خمسمية و
ستة و أربعين نانو متر طب إيش عرفني إن هذا ال
wavelength؟ في ال kit نفسه تبع ال total protein
بعطيك ورقة pamphlet هذه ال pamphlet بيكون مكتوب
فيها الطول الموجي اللي البروتينات بيصيرلها انتصاص
عليهبتصفر الجهاز على الـ Blank اللي هو عبارة عن
reagent فقط بعد هيك بتحط ال standard انبوبة ال
standard في الكيوفيت وبتقرا إيها وبتاخدي
absorbance لل standard وبعدين بتاخدي absorbance ل
ال sample وهيك بنكون خلصنا بيقولنا ال color اللون
ال move بيضلوا stable مدة ساعة ستين دقيقةهل جيت
كيف بدي أحسب تركيز الـ Total Protein؟ هيني، اشتغلت
الفحص بسيط جدا، عشر دقائق مدته النتيجة بتطلع عن
طريق تطبيق بيرزلو، قانون بيرزلو اللي هو، إيش
القانون بيحكي؟ أخدناه في فحص السكر الـ
Concentration لل patient sample يعني تركيز الـ
Total Protein في عينات المريض، إيش تساوي؟الـ
Absorbance تاعت الـ Sample على الـ Absorbance للـ
Standard ضرب الـ Concentration للـ Standard
Absorbance للـ Sample، Absorbance للـ Standard
وتركيز للـ Standard كله معلوم فبالطبقي بتطلعلك
تركيز الـ Total الـ Protein في الـ Patient Theorem
والوحدة بدناش ننساها Gram Per Deciliterلو كتبتلك
gram per liter وبدك تحوليها ل gram per deciliter
النتيجة بتجسميها على عشرة تمام؟
الـ reference range الـ normal range reference
range for total proteins الـ total protein في جسم
الإنسان 66.6 ل 81.4 gram per liter لو بدي أحولها ل
gram per deciliter بقى أجسم الرقم على عشرة يعني
حكيتلكوا الـ total protein في بلازمة دم عندنا من 6
.6 ل 8.1 gram per deciliterتمام؟ هنا كتبل كل واحدة
بالـ gram per liter results for males are
approximately واحد gram per liter higher than
results for female this difference is probably not
of clinical significance هنا بيحكيلي الـ total
protein concentrationتركيز الـ Total Protein عند
الرجل أعلى من تركيز الـ Total Protein عند المرأة
بنسبة 0.1 gram per deciliter أو 1 gram per liter
وهذه القيمة قليلة جدا تكاد انها تكون مهملة، تمام؟
معلومة بسيطة عارضة يعني إن الـ Newborns في الموليد
الجدد الـ mean serum بروتين concentration تركيز
الـ total protein عندهم 5.7 gram per deciliter
تمام؟أو 57 gram per liter إذا ملاحظين قليل الإنسان
الطبيعي بيبدأ من 6.6 أما الأطفال 5.7 يعني عندهم
الـ total protein قليلة لو سألناكم سؤال ليش؟ ما هو
بديهي المولود الجديد لسه أعضاءه ما بتكون متكاملة
ال liver عنده لسه مش كاملمش قادر يؤدي وظيفته عنده
أصلا الـ liver لسه مش مكتمل وبالتالي مش هيقدر يصنع
لبروتينات بالوضع الطبيعي فأكيد الـ total protein
عند الموليد الجدد هتكون قليل أقل من الطبيعيتبدأ
تزيد to 60 gram per liter بعدين تبدأ تزيد ل 6 gram
per deciliter خلال أول ست شهور لما يصير عمر الطفل
ست شهور تبدأ تزيد عنده، تمام؟وبدّه بعد ما يصير
عمره تلت سنين بدّه التركيز تبعه تبع الـ Total
Protein يكون مثل تركيز الإنسان الـ Adult الطبيعي
يعني بيصير 6.6 لـ 8.4 لما يصير عمره تلت سنوات خلاص
زي الـ Adult بيكون تركيز الـ Total Protein عنده،
تمام؟
الـ Hypo-protonemia والـ Hyper-protonemia حالات
مرضية لما أحكيلكم Hypo-, sorry Hypo-protonemia
كلمة Hypo معناها انخفاض البروتونيميا انخفاض الـ
total protein في بلازمة الدم يعني ماتة الـ total
protein بتجل تمام؟ أول شغلة في الملء الـ nutrition
في سوق التخزينة ماتك لأكلات فيها بروتيناتأو
«malabsorption» عندك سوء امتصاص يعني إنسان بياكل
لحمة وبقليات لكن عنده مشكلة في الأمعاء ماتمتص
لبروتينات وبالتالي بيصير عنده كأنه مش ماكل
وبالتالي بيصير عنده حالة الـhypoabrotonyالحالة
التانية Excessive Loss as in Renal Disease عنده
مشكلة في الكلة الكلة بتسرب لبروتينات مع الـUrine
حكينا يفترض لبروتين ماينزلش مع الـUrine يصيرله
إعادة امتصاص بس في حالات الـRenal Disease مشاكل في
الكلة بيصير عنده Excessive Loss فقد مهول
للبروتينات في الـUrine وبالتالي لبروتينات في الدم
هيجيل مستواهاG.I. Leakage هاد اختصار لـ
Gastrointestinal Leakage يعني بيصير عندنا تسرب من
الأمعاء كيف؟الأمعاء فيها مشاكل فبيصير عندي فقد الـ
Gastrointestinal Leakage معناها مشكلة في الأمعاء
وبالتالي يحدث هناك تسرب للبروتينات مع الستول يعني
بتخرج البروتينات مع الستول إذا كان عندك مشكلة
بالكلة، هتخرج مع الـUrine عندي مشكلة بالأمعاء في
الـGastrointestinal Tract في القناة الهضمية، هتخرج
البروتينات في الستول والوضع الطبيعي ممنوع أشوف
بروتين لا في الـUrineولا في استول Excessive
bleeding صار عندك نزيف لما بيصير عندك نزيف الإنسان
بفقد الدم فالدم أصلا فيه بروتينات وبالتالي هيجلب
ال severe burns الحروق اللي بتكون من الدرجة
التالتة يعني حروق عميقة جدا هذه الحروق بيصير في
عنارشح للثوائل رشح لبلازمة الدم من خلال الحرق نفسه
لما بيصير عندك رشح للبلازمة البلازمة بتطلع يعني
إيش؟ يعني البروتينات برضه بتطلع من خارج الجسم هذا
حرك من الدرجة التالتة برضه في الحروق بيصير عندنا
رشح للبروتينات عن طريق ال skin تطلع عن طريق ال
skin excessive catapolism يعني في عندنا الـ
catapolism معناه الهدمهدم وتكسير البروتينات بشكل
مهول مثلا البروتياز بتكون overactive عندنا
بروتينات اسمها بروتياز بتكسر البروتينات نشاطها
مهول يعني نشاطها غير عن الطبيعي وبالتالي أي بروتين
بتصنع بتكسره وبالتالي محصلة الـ total protein في
الدم هتجل liver disease عندك مشكلة في الكبد معناه
مش هيتم تصنيع البروتيناتأما حالات الـhyper،
بروتونيميا كلمة hyper معناها ارتفاع بروتونيميا
يعني ارتفاع الـtotal بروتين في الدم نتيجة
الـdehydration، نتيجة الجفاف لما إنسان يصير معاه
جفاففي الجفاف الإنسان يفقد سوائل صح ولا لأ
وبالتالي لما تفقد سوائل البروتينات الموجودة في
البلازمة بتتركز في جسمك تمام؟ البروتينات الموجودة
في البلازمة بتتركز في جسمك وبالتالي بإزداد تركيزها
حالات الـ Monoclonal و الـ Polyclonal هدى أمراض
مناعية هتاخدوها في المناعة الـ Monoclonal و الـ
Polyclonal معناها زيادة في الـ Antibodies ما أنتوا
عارفين الأجسام المضاد للـ Antibodies هي عبارة عن
بروتينات فلو زادت الـ Antibody معناة Total Protein
هيزيد، تمام؟ هدى حالات مرضية هتفهموها أكتر في
المناعةوالتفاجأة فقط تؤثر على تركيز الالبومين أو
الـ Immunoglobulins ستجعل الوضع مرتبط بقيمة
البروتين المتعاملة لو سألناكم سؤال بقيمة البروتين
المتعاملة اللي في بلازمة ده عبارة عن شو عن شقين
حكينا الالبومين ذات لجلوبولين واتفجنا أن الالبومين
يشكل نص الـ Total Protein يعني نص البروتينات
الموجودة في البلازمة عبارة عن ألبومين ذائد
Globulin الـ Globulin قلنا عبارة عن أربع أنواع
Alpha-1, Alpha-2 و Beta و Gamma Gamma هي الـ
Immunoglobulin هي الـ Antibodies الـ Gamma
-Globulin هي الـ Immunoglobulin الأجسام المضادةتمى
نحكي عنها Gamma Immunoglobulin هلجيت يا جماعة
بيقوللي إنه لو صار عندي مشكلة في تركيز الألبومين
أو صار عندي مشكلة في تركيز الـ Immunoglobulin اللي
هي الـ Gamma Iglobulin هدول فقط هم اللي هيأثروا
على تركيز الـ Total Protein ككل ليش لو سألناكم
سؤال؟ لأنه أصلاًتركيزهم هو الأعلى في كل البروتينات
يعني الـAlbumin هو تركيزه الأعلى وبيجي ورا
الـGamma Immunoglobulin وبالتالي أي خلل فيهم، أي
خلل في الـAlbumin أو في الـAntibodies في
الـImmunoglobulin هيأثر على كل تركيز الـTotal
البروتينلكن لو صار عندي مشكلة في تركيز الـ Alpha-1
Globulin أو الـ Alpha-2 Globulin أو الـ Beta
-Globulin مش هيأثروا كثير في الـ Total Protein ككل
مش هيأثروا في تركيز الـ Total Protein ككل وهذا
بيحكيليها النقطة التانية Other Ceramic Proteins
البروتينات الأخرى اللي موجودة في الـ Serum are
never imprisoned in high enough concentrations مش
موجودة بتركيز عالي كفاية for it changes إنه يغيرلي
الـ Significant Overall Effect البروتينات الأخرى
مش موجودة بالتركيز الكافي عشان لو حدث خلل فيها
يصير عندي خلل في التوطن، لأإذن من ملخص المحاضرة
الـ albumin أو الـ immunoglobulin حدث فيهم مشكلة
هيأثر على التركيز الكلي للـ total protein لكن الـ
α و أن الـ α2 و الـ βoglobulin لو حدث فيهم خلل هو
أصلا تركيزهم مش عالي كتير فلو حدث فيهم خلل مش
هيبين وبالتالي الـ total protein مش هيتأثر
Note ملاحظة مهمة to detect a small amount of a
protein we can use الـ TCA اختصار لـ
Trichloroacetic Acid أو مادة الـ Sulphosalicylic
Acid بتركيز 3% هلجيت يا جماعة في عينة الـ urine
أحياناً بتحط الـ strip و بتطلعي و بعطيك الـ strip
أنه مافي بروتينلكن أحيانًا ممكن تكون كمية البروتين
اللي موجودة في الـ urine very very small قليلة
جدًا وبالتالي الـ Strip ما بيقدر يكشف عنها الـ
Strip بيعطيك أنه مافيه بروتين بس فعليًا هو بيكون
فيه بروتين في الـ urine ولكن تركيزه قليل فإحنا لما
نشكبروح بأحط على عينة الـ urine مادة الـ TCA ممكن
أخدتوها ده بالسوائل أو مادة الـ sulfosalicylic
acid هذه مادة حنضية، إيش بتعمل لما بتحطيها على الـ
urine؟ لو الـ urine فيه بروتين، هذه مادة حنضية
هتكسر لبروتينات، هتعمل denaturation لبروتينات
وبالتالي هتحول عينة الـ urine لعينة معكرة، لعينة
تربط، فإنت لو حطتيها ولجيت العينة صارت معكرة،
معناه فيه بروتين جوا الـ urine، لكن لو حطيت هذه
المادة الحنضية على الـ urine وما صار فيه تغيير على
الـ urine، معناه هذا الـ urine مافيه بروتينالـ TCA
أو الـ Sulphosalicylic Acid مبدأ المادة البروتين
الـ denatured by acid لو كان فيه بروتين في اليورين
وضفت عليه هذا الحامض هيكسر البروتين الاسد هذا
هيكسر البروتين الـ precipitates هيرسبه and renders
the specimen more turbid ويخلي عينة اليورين معكرة
بالزيادة as it is concentrationincreased وهنا انت
تعرفي انه اكيد فيه البروتين كمان شغلة مش بس بستخدم
هذه الطريقة عشان اكشف عن البروتين اللي موجود
بكميات قليلة جدا في اليورانبطريقة الـ TCA أو الـ
SSA بقدر أحسب تركيز البروتين اللي موجود في عينة
الـ CSF الـ Cerebrospinal Fluid ثائل النخاع الشوكي
مش حاكينا هذا السائل فيه سكر و فيه بروتينات لكن
نسبة السكر جداش قليلة و نسبة البروتينات برضه قليلة
فلو انت جبت عينة CSF ركزوا معي وبدك تحسبي الـ
Total Protein اللي فيها وروحت اشتغلتي على هذه
العينة ضفت عليها الـ Reagent تبع الـ Pyrite
Reagent اللي هو الـ Reagent الأول اللي حكناه مش
بجيس الـ Total Protein بس كتعرفوا ان الـ Pyrite
Reagent بجيس الـ Total Protein اللي موجود في
البلازمة الدملكن ما بقدر يجيس الـ Total Protein
اللي موجود في الـ CSF ليش؟ خلاص، هذا الـ Reagent
له Linearityخطية يعني بيجيس من قيمة معينة واطلع
لفوق بقدرش يكشف عن كمية البروتين القليلة اللي
موجودة في الـ CSF إذا الـ Priority Reagent بقدرش
يقيس البروتينات اللي موجودة في الـ CSF لأن نسبتها
قليلة جدا فعمله Reagent جديدهذا الـ Reagent جواته
مادة الـ TCA أو مادة الـ SSA بيضفوها بيضفوله كت
خاص طبعاً بيضفوها على عينة الـ CSF وبيصير الـ
Reaction طبعاً إيش طريقتها؟ إن هذا الـ Acid هيروح
عينة الـ CSF يكسر البروتينات اللي فيهاويرسّب
لبروتينات وبالتالي انت هيك بتعملي Concentration
بتركزي لبروتينات عشان يقدر ال kit يقيسها اذا
الملخص انه ال CSF عشان اجيس ال total protein اللي
فيه له kit خاص ال total protein باختلف عن طريقة ال
«puret» method ما اسمه «puret» reagent انما ال
reagent المستخدم اسمه ال «TCA reagent»