أكمل فيما يتعلق بـ MacConkey المكونكي أجار نستخدمها
لحتى نعزل الجرام negative يعني بدنا نعزل
الـ coliform يعني بدنا نمي الجرام negative وبتعمل
inhibition للجرام positive تُعتبر هي الـ media
selective and differential media selective يعني
انتقائية بتنمي نوع وبتعمل inhibition لباقي الأنواع
differential بتميز بين الأنواع اللي راح تنمو على
الطبق selective الـ Gram-positive بكتيريا are
inhibited by the presence of يعني الـ selective
agent فيها هي الـ bile salt والكريستال فيولد
بيعملوا inhibition للـ Gram-positive بكتيريا
فبالتالي معظم الـ Gram-negative بكتيريا will grow
طيب الـ differential agent اللي فيها اللي بيميز من
الـ gram positive اللي راحته المعلق الطبق هو
اللاكتوز أنا بحكي عن ميدية الما كونك لسه قبل ليسر
عليها أي تعديل فيها سكر اللاكتوز، هذا يعتبر كـ
differential agent بيميزها إلى lactose fermenter و
non-lactose fermenter تختار بين الـ gram-negative
بكتيريا باستخدام قهوة اللاكتوز اللاكتوزالكوليفارم
بصلاي ي produce acid from lactose fermentation
معروف زي ما قلنا في المعمل السابق أنه الكوليفارم
بتعمل fermentation لسكر اللاكتوز بيطلع منه acid
with gas فالكوليفارم بتطلع acid من ال fermentation
للاكتوز فبالتالي الكلنس بتحول لونها إلى لون red
وقلنا إن الـ pH Indicator فيه المكونكي اسمه الـ
neutral red الشريشة كولاي produces even greater
quantities of acid الشريشة كولاي أクター واحدة من
الكوليفورم بتطلع كمية أسد من ال fermentation
لالكتوز فبالتالي بالإضافة أنه بغير لون الكولونز
إلى لون أحمر برضه هيغير لون الـ media إلى لون أحمر
Causing the surrounding medium and the colonies
to turn red Non-coliform Bacilli don't ferment
lactose اللي ما بتعمل fermentation للاكتوز لكنها
إجرام نيجاتيف بظهر لونها إما uncolored يعني
colorless أو بيكون transparent on MacConkey وممكن
كمان يكون لونها لون أصفر The gram-positive bacteria
don't die on this media احنا قلنا إنه الـ
selective agent اللي بالميديا بتعمل inhibition للـ
gram-positive ما بتعملها killing وما بتموتها فقط
inhibition يعني تثبيت their growth is just
inhibited هي عند ميديا الماكونك أجار الاشريشا
كولاي تعتبر من ضمن الـ gram نيجاتيف يعني هتنمو على
الطبق لكن معروف إن الاشريشا كولاي من ضمن الكوليفورم
بتعمل fermentation للكوليفورم اللكتوز وقلنا إن
الاشريشا كولاي بتطلع كمية أسد كتيرة فبالتالي بتغير
لون الكولنز والميديا إلى لون أحمر الـ Enterobacter
aerogenes هاي برضه من ضمن الكوليفورم فبتعمل
fermentation لسكر اللكتوز بيطلع منه أسد وبتكون لون
الكولنز لون أحمرلبروتياس vulgaris لبروتياس من ضمن
عائلة الانتيرو بكترياسي إجرام نيجاتيف لكنها non
-lactose fermenter بتنمو على الطبق لإنها إجرام
نيجاتيف لكنها ما بتعمل fermentation لسكر اللكتوز
فبيكون لونها لون أصفر أو transparent Salmonella
typhimurium نفس قصة لبروتياس Non-Lactose Fermenter
الاستفيلة الككاس Oreous هي من ضمن الـ Gram
Positive وإحنا قلنا إن الـ Media هي بتعمل
Inhibition لـ Gram Positive يعني مش هيصير فيها
نمو خالص نجعل السوربيتول مكنكي أجار أسمك Majority
of Escherichia coli O157H7 don't ferment sorbitol
لاحظوا مكتوب كلمة majority يعني غالبية الـ O157H7
ما بتعمل fermentation يعني ممكن في أنواعها تعمل
fermentation للـ sorbitol لكن الـ Fecal Escherichia
coli يعني الـ Escherichia coli اللي بتكون من ضمن
الـ Fecal Coliform اللي احنا ابنا عارفها بتعمل
fermentation للـ Sorbitol لكن غالبية الـ
Escherichia coli O157H7 ما بتعمل fermentation للـ
Sorbitol إيش صار في modification على ميديا
المكونكي اللي حتى صار اسمها أسمك؟أول حاجة
استبدالنا سكر اللكتوز بسكر السوربيتول تاني شغلة
supplemented with cefixime and tellurite الـ
Cefixime هاد نوع من الـ antibiotic بعمل inhibition
لليكرام positive الـ Tellurite هاد selective agent
لإتنين شو بيعملوا suppress other sorbitol non
-fermenting organism بيعملوا inhibition لبكتيريات
غير ال O157H7 اللي مابتعمل fermentation لسكر ال
sorbitol يعني بس بدها تنمو على الطبق ال O157H7
Most non-O157 serotyping Escherichia coli ferment
sorbitol المقصود فيها إنه Escherichia coli أنواع
أخرى أو strains أخرى غير الـ O157H7 هتعمل
fermentation للسوربيتول فقط الـ O157H7 هي الماب
تعمل fermentation للسوربيتول من ضمن Escherichia
coli
المخطط هاد بيميّلّي كيف لما بدي أعمل isolation
للإشاريشة coli O157H7 أول يوم بدي أعمل ال primary
enrichment بحط 25 جرام أو 25 مل من ال sample بحط
عليها 225 مل من enrichment media ولتكن مثلا
لتريبتكسوي بروث بعد هيك بسمحلهم فترة incubation
على درجة حرارة 42 سيليزيوس لمدة 24 ساعة بعد هيك
بروح أزرع على ميديا أجار ممكن أزرع على الأسماك أو
ممكن أزرع في ميديا تانية اسمها الفلورو أوكالت
الشريشا كولاي O157 أجار هي ميديا بأزرع عليها
بعملها incubation وبعد هيك بعرضها ل ال UV وبقى
أشوف ال fluorescent معناته نامية O157H7 بعد هيك
بعمل ال biochemical test الفحوصات التأكيدية
والتعريفية باخد مين بالظبط اللي على ميديا الأسماك
باخد الـ colonies اللي لونها colorless بروح بعمل
عليها ال biochemical test والسيرولوجيا نيجي على
كمان ميديا تانية اسمها لـ ChromAgar وهي مخصصة
للإشاري شكولاي O157H7 الـ Media High بيكون فيها
chromogenic mixture ماحد بيعرف شو في مكوناتها إلا
الشركة المصنعة بحيث إن هي يعني اللي تتحكم بالسعر
لإلها يعني من باب الاحتكار تعتبر high rapid and
reliable detection of enterohemorrhagic
Escherichia coli O157 طريقة سريعة ومعتمدة للكشف عن
الـ O157H7 Easily distinguishable colors due to
purple color link they have acquired بسهولة بقدر
أميز الإشارة شكولاي O157H7 على الـ media high ليش؟
لأن لونها بيكون بيربول most other bacterial species
are inhibited باقي أنواع البكتيريا بيصيرها
inhibition أو لو نمت على لكروم أجار بيكون لونها
blue or colorless يعني لو لما نشوف لون purple
معناته هاي إشريشة كلها IO157H7 أما لو كان الأزرق أو
colorless معناته هاد نوع تان من البكتيريا other
than Escherichia coli O157-H7 despite specificity
is improved in comparison to Sorbitol-MacConkey agar
بالرغم إن صارت فيها الخصوصية أعلى واتطورت عن
الخصوصية اللي في ميديا الأسماء طيب إيش المقصود بال
specificity أساسا؟الـ specificity يعني لما يطلع
لون purple هات معناته الـ purple ناتج من بكتيريا
أشريشيا كولاي O157H7 يعني بتخصص اللي بدنا إياها
طيب When direct isolation method is used, the false
positive must be screened out by additional tests
مع إنه إلها specificity عالية، لاحظوا إنه ممكن
اللون البربل يطلع مش بس الشريشة كولاي O157، ممكن
أنواع تانية من البكتيريا على هذه الميديا بتعطي لون
بربلفهم عاد كيف عرفوا هيك أنهم عملوا biochemical
test أو additional test تمام الشريحة coli O157 على
ميدة الكروم أجار بيكون لونها purple other
bacterial colonies inhibited أو بيكون لونها أزرق
أو لونها بيكون colorless الكولونيز تظهر كبنك على
كروم أجار بنك أو موف أو purple هيكلها ألوان لـ
O157 على ميديت الكروم أجار بعد انقباش بعد ما أعمل
انقباش من 16 إلى 24 ساعات على درجة حرس 7 أو 30
سليسيا البرنامج يجب أن يتعامل على ممكنة كولونيز
O157 التي ليسوا أسماك لو بدي أشتغل على ميديتلسمك
هتكون الـ O157 لونها colorless ممكن هتكون لونها
موف أو pink على لكروم أجار لو بكتيريا تانية غير
الـ O157 على ميديا لكروم أجار هيكون لونها أزرق أو
colorless الـ Latex Agglutination Test had من ضمن
السيرولوجيا أنتبادري أكشن to identify
Escherichia coli O157, a portion of a well
-isolated colony باخد كولونيه should be selected
from the culture plate يعني لو كنت أنا أمنمياها على
ميديا الأسماك بعناته بدي أخد الـcolony اللي
لونها colorless لو كنت أمنمياها على ميديا لـChrom
Agar بدي أخد الـcolony اللي لونها purple بعد هيك
بدي أتأكد من خلال Serology و الـBiochemical Test
طب بالنسبة للـSerology شو بعمل؟ باخد مسحة من
البكتيريا بحط عليها O157 Antisera أو باخد مسحة من
البكتيريا بحط عليهاH7 Antisera وبعملهم mix وبشوف
وين صار فيه agglutination لاحظوا عندكم بالرسمة في
الصف اللي تحت بظهر زي حبات الرمل او يعني بتكون زي
particles exactly زي في حالة ال blood group طيب
بعد هيك بدنا نعمل ال biochemicalTest فحوصات
تعريفية للبكتيريا الفكرة أنه بعد ما أكون زارعة على
media selective زي مثلا الأسماك أو لكروم أجار
فالأسماك بروح أاخد البكتيريا اللي لونها بيكون
colorless أو لو كنت زارعة على لكروم أجار باخد
البكتيريا اللي لونها pink أو mauve أو purple بجري
عليها الفحوصات التأكيديةبس قبل أن أعمل فحوصات
تأكيدية لازم تكون البكتيريا نامي على general media
general media يعني media non selective بروح أزرع
البكتيريا على ال tryptic soy agar هذه media
general non selective media أو ممكن heart infusion
agar أو ال blood agar تمام بعد ما بزرحهم بروح أخد
منهم، بروح أعمل عليهم الـ Biochemical Test من ضمن
الفحوصات اللي بأشتغلهم زي ال «IMViC» اختصار للـ
Indole Methyrid-Vagasproskler-Citrate فطالما الـ
O157H7 من ضمن الاشريشة كلها فهتكون النتيجة
Positive Positive Negative Negative